ГОСТ 10444.2-94 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus

7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1 Посевы для определения количества S. aureus

7.1.1 Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см) продукта предполагаемое количество S. aureus или их количество, указанное в нормативно-технической документации на анализируемый продукт.

7.1.2 При определении количества S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды по 0,1 или 0,2 см продукта или его разведения наносят на поверхность одной из сред, указанных в п.6.2: Байрд-Паркер агара, молочно-солевого агара, яично-желточно-азидного агара или яично-желточно-солевого агара. Преимущественно для посева используют Байрд-Паркер агар. Для посева продукта или каждого его разведения используют две параллельные чашки Петри со средой. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.

7.1.3 При определении количества S. aureus по методу НВЧ высевают три последовательные навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.

Каждую навеску продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности высевают в колбы или пробирки с одной из сред, приготовленных по п.6.2.4.

Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и питательной средой 1:6 или 1:7.

7.2 Посевы для выявления S. aureus в определенной навеске продукта

7.2.1 При выявлении S. aureus в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении с предварительным обогащением эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред, приготовленных по п.6.2.4.

Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1:6 или 1:7.

7.2.2 При выявлении S. aureus в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении без предварительного обогащения эту навеску или разведение в количестве 0,1 или 0,2 см наносят на поверхность одной из селективно-диагностических сред, как указано в п.7.1.2.

7.3 При посеве жидких высококислотных продуктов для предотвращения снижения рН сахарного или солевого бульона на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2.

При посеве твердых высококислотных продуктов доводят рН до 7,0±0,2 в посевах, или при приготовлении сахарного или солевого бульона рН устанавливают выше указанного в п.6.2.4, с учетом его последующего снижения при внесении продукта. Если высевают не твердый продукт, а его исходное разведение, то рН доводят в исходном разведении.

Доведение рН проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной или лимонной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия устанавливают опытным путем.

7.4 При анализе пищевых продуктов с большим содержанием NaCI проводят посев продукта или его исходного разведения в сахарный бульон, во всех других случаях для посева используют солевой бульон.

7.5 Посевы по пп.7.1 и 7.2 на агаризованных жидких средах инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 48 ч. Чашки Петри с посевами инкубируют дном вверх.

7.6 Для подтверждения роста микроорганизмов в жидких средах из них после инкубирования по п.7.5 делают пересевы петлей по ГОСТ 26670 на поверхность одной из селективно-диагностических сред, указанных в п.7.1.2. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч.

7.7 Посевы по пп.7.1.2, 7.2.2, 7.6 на агаризованных средах после инкубирования просматривают и отмечают рост характерных колоний.

На Байрд-Паркер агаре колонии S. aureus выглядят черными, блестящими, 1,5-2,5 мм в диаметре, окружены зоной лецитиназной активности.

На молочно-солевом агаре колонии S. aureus круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара, с ровными краями, диаметром 2-2,5 мм, окрашены в желтый, золотистый, лимонно-желтый, кремовый, палевый или белый цвет.

На яично-желточно-азидном и яично-желточно-солевом агаре колонии S. aureus окружены зоной лецитиназной активности.

В посевах по п.7.1.2 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний, и подсчитывают их.

В посевах по пп.7.2.2 и 7.6 отмечают рост характерных колоний без подсчета их количества.

7.8 Подтверждение принадлежности характерных колоний к S. аureus

7.8.1 Для подтверждения принадлежности характерных колоний к S. aureus отбирают не менее 5 колоний (если при посеве по пп.7.2.2 и 7.6 выросло менее 5 колоний, то отбирают все выросшие колонии) и пересевают на поверхность одной из скошенных питательных сред: мясо-пептонного агара, приготовленного по п.6.2.3, или среды из сухого питательного агара, приготовленного по п.6.2.5.

Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24 ч.

У выросших микроорганизмов определяют отношение к окраске по Граму, способность коагулировать плазму крови кролика, образовывать каталазу и ферментировать мальтозу в анаэробных условиях.

7.8.2 Окраска по Граму

Из культур, выросших как указано в п.7.8.1, готовят мазки, окрашивают их по Граму (по ГОСТ 30425) и микроскопируют.