ГОСТ Р 50928-96

Группа С19

     

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРЕМИКСЫ

Методы определения витаминов A, D, Е

Premixes.
Methods for determination of vitamins A, D, E

ОКС 65.120

ОКСТУ 9209, 9709

Дата введения 1997-01-01

     

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН МТК 4, АООТ "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (АООТ "ВНИИКП")

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 29 июля 1996 года N 487

3 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4 ПЕРЕИЗДАНИЕ

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает хроматографические методы определения витаминов A, D, Е в премиксах с различными наполнителями из одной навески.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 19627-74 Гидрохинон (парадиоксибензол). Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

_________________

* С 1 июля 2002 года вводится в действие ГОСТ 24104-2001.

ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26573.0-85 Премиксы. Технические условия

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

     3 Определение витаминов А, Е обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографией

Сущность метода заключается в экстракции витаминов А (ретинола ацетат) Е (-токоферола ацетата) из премикса изопропиловым спиртом и последующем анализе содержания витаминов с использованием жидкостного хроматографа "Милихром".

3.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром" по нормативному документу [1] или его последующие модификации со спектрофотометрическим детектором и спектральным диапазоном 190-360 нм.

Спектрофотометр со спектральным диапазоном работы 186-1100 нм.

Колонка хроматографическая одного из указанных размеров: 2x64, 2x80, 2x120 мм с числом теоретических тарелок не менее 4 тыс., заполненная одним из следующих сорбентов: Силасорб С 18, Силасорб РНС 18, Сепарон С 18.

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Баня водяная с терморегулятором.

Колбы конические со шлифом вместимостью 25, 50 см, КН-2-25-18МХС по ГОСТ 25336.

Пипетки 1-1-(1, 2)-1 по ГОСТ 29169.

Пипетки 1-1-1(2)-1(10) по ГОСТ 29227.

Цилиндры 1(2, 3, 4)-100, 1(2, 3, 4)-500 по ГОСТ 1770.

Колбы мерные 2-25-1(2) (исполнения 2, вместимостью 25 см, 1-го или 2-го класса точности) по ГОСТ 1770.

Колбы мерные 2-50-1(2) по ГОСТ 1770.

Воронка ВФО-40-ПОР 16 ХС по ГОСТ 25336.

Холодильник ХПТ-1-100-18 ХС по ГОСТ 25336.

Ретинол ацетат по нормативному документу [11].

Витамин Е-ацетат по нормативному документу [12].

Спирт изопропиловый (пропанол-2), х. ч. по нормативному документу [2].

Спирт пропиловый (пропанол-1), х. ч. по нормативному документу [3].

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, х. ч. по нормативному документу [4].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается использование другой аппаратуры, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не ниже указанных.

3.2 Порядок подготовки к проведению контроля

3.2.1 Отбор проб - по ГОСТ 13496.0

3.2.2 Приготовление элюента для хроматографии

Трехкомпонентный элюент готовят смешиванием ацетонитрила, пропилового спирта и дистиллированной воды в объемном соотношении 42:50:8. Для этого в склянку вместимостью 1000 см вносят цилиндром 500 см пропилового спирта, 420 см ацетонитрила и 80 см дистиллированной воды.

Приготовленную смесь растворителей фильтруют через стеклянный фильтр и помещают в стеклянный сосуд с притертой пробкой. Полученный раствор можно хранить в течение 1 мес.

3.2.3 Подготовка хроматографической колонки

При использовании новой колонки или колонки после длительного перерыва в работе из нее следует удалить воздух и тщательно промыть элюентом до получения стабильной нулевой линии. Для этого через колонку пропускают элюент в количестве 20-30 свободных объемов колонки, т.е. два полных шприца насоса хроматографа при расходе элюента сначала 50 мкдм/мин, а затем 100 мкдм/мин. Промывку колонки заканчивают при получении стабильной нулевой линии.

После промывки колонки проводят ее насыщение витаминами А, Е, для этого выполняют 7-10 анализов наиболее концентрированных градуировочных растворов витаминов А, Е. Насыщение колонки прекращают, когда отношение разности между двумя последовательными определениями концентрации витамина А(Е) к среднему арифметическому значению этих операций не превышает 3%.

При правильной эксплуатации колонка выдерживает 500-600 анализов.

3.2.4 Приготовление растворителя для экстракции витаминов А, Е из премикса

Для экстракции витаминов используют двухкомпонентный экстрагент состава: изопропиловый спирт и дистиллированную воду в объемном соотношении 97:3. Для этого в мерную колбу вместимостью 1000 см вносят пипеткой 30 см дистиллированной воды и доводят до метки изопропиловым спиртом.

Хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой до полного использования экстрагента.

3.2.5 Определение активности витамина А в масляном препарате

(0,1±0,002) г препарата растворяют в абсолютном спирте в мерной колбе вместимостью 50 см. Доводят этим же спиртом объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Отбирают 1-2 см полученного раствора в колбу вместимостью 50 см, заполняют ее до метки абсолютным спиртом и измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 326 нм в кювете толщиной слоя 1 см. В качестве контрольного раствора применяют абсолютный спирт.

Массовую концентрацию витамина А, , г/см, определяют по формуле

,                                                 (1)

где - оптическая плотность раствора;

, - первое и второе разведения, см;

- плотность препарата, г/см;

- масса навески препарата, г;

- объем раствора, используемый для второго разведения, см;

1550 - удельный показатель поглощения Е при длине волны 326 нм для 100%-ного раствора витамина А в абсолютном спирте;

100 - коэффициент.

Содержание витамина А в 1 см соответственно должно быть 0,0310-0,0378 г (90000-110000 ME), 0,0619-0,0757 г (180000-220000 ME), 0,0774-0,0946 г (225000-275000 ME).

Полученные результаты используют для расчета содержания витамина А в стандартном раст

воре.

3.2.6 Построение градуировочного графика для витамина А

Для приготовления стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина А, необходимую для получения раствора с активностью 30000 ME в 50 см или 600 МЕ/см. Навеску помещают в мерную колбу вместимостью 50 см, растворяют в изопропиловом спирте, перемешивают и доводят этим спиртом до метки.