МУК 4.2.992-00 Методы выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки E. coli O157:H7

6. Проведение анализа

Принципы бактериологического исследования с целью выделения Е. coli О157:Н7 не отличаются от общепринятых для возбудителей острых кишечных инфекций и включают методы классического бактериологического исследования, основанные на выделении чистой культуры микроорганизма и последующей его идентификации по культурально-морфологическим, биохимическим, антигенным свойствам. Основным критерием отнесения штамма к группе энтерогеморрагических эшерихий являются данные, подтверждающие продукцию веротоксинов. Штаммы, не продуцирующие токсинов, не могут считаться возбудителями эшерихиозов у людей.

6.1. Посев клинического материала с целью выделения Е. coli О157:Н7 проводится на питательную среду Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар (прямой посев) и в соотношении 1:5 в среды накопления, которыми могут служить бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью (ГОСТ Р 50474-93), GN Enrichment Broth асс. to HAJNA (Cat. N 10756, фирма "MERCK", Германия). При отсутствии нативного материала испражнения, забранные в консервант, засевают в среду обогащения двойной концентрации (приложение 1).

6.2. Посев пищевых продуктов для выявления БГКП (колиформных бактерий) в определенной навеске продукта проводится в соответствии с ГОСТ Р 50474-93. Дополнительной питательной средой для выявления Е. coli О157:Н7 является Сорбитол E. coli О157:Н7 агар (приложение 2), потому что плотная питательная среда, используемая для выделения колиформных бактерий (Эндо), не может быть использована для целенаправленного поиска E. coli О151:Н7, т.к. данный микроорганизм разлагает лактозу подобно другим эшерихиям.

6.3. Подготовку пищевых продуктов для выявления E. coli О157:Н7 с применением сред обогащения осуществляют в соответствии с ГОСТ Р 50480-93 "Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella", но в качестве сред обогащения могут быть использованы среда Кесслера, трипказо-соевый бульон, бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью, Грам-негативный бульон (GN-бульон). После термостатирования посевов при 37 °С в течение 18-24 ч проводят высев на плотную среду Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар, обладающую дифференциальными и селективными свойствами (приложение 3).

Отличительным биохимическим свойством Е. coli О157:Н7 является отсутствие способности ферментировать сорбитол. Для выделения штаммов Е. coli О157:Н7 необходимо использовать Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар или среды зарубежного производства: Fluorocult Е. coli О157:Н7 Agar (Cat. N 1.04036); Sorbitol MacConkey Agar (SMAC-agar) Cat. N 1.09207; Fluorocult HC Agar acс. to SZABO Cat. N 1.09206 (фирма "MERCK", Германия).

Характеристика роста Е. coli О157:Н7 на плотных питательных средах представлена в табл.1.

Таблица 1

Характеристика роста Е. coli О157:Н7 на плотных питательных средах

Если на чашке с Сорбитол Е. coli О157:Н7 агаром выросли 1-2 сорбитол-отрицательных колонии, то серологические исследования проводят после посева на одну из сред для первичной дифференциации: агар Клиглера, Олькеницкого, Ресселя. В случае роста на чашке Петри однотипной культуры с 3-5 колониями проводят серологическую идентификацию на стекле с "О"- и "Н"-сыворотками к антигенам Е. coli О157:Н7, либо с латексным антительным диагностикумом.

Не менее 5 сорбитол-отрицательных колоний пересевают на среду для первичной идентификации. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С 18-24 часа. При получении на следующий день результатов, подтверждающих принадлежность культуры к роду эшерихий (ферментация глюкозы и лактозы с образованием кислоты и газа, отсутствие HS), проводят дальнейшую биохимическую и серологическую идентификацию (приложения 2, 3).