• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
0 %
Начинаю
Завершаю
Действующий


ГОСТ Р 53185-2008

Группа Н79

     
     
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАПИТКИ БЕЗАЛКОГОЛЬНЫЕ И СЛАБОАЛКОГОЛЬНЫЕ ТОНИЗИРУЮЩИЕ

Методы испытания

Alcohol-free and low-alcoholic tonic beverages. Test methods



ОКС 67.160.20
ОКСТУ 9185

Дата введения 2010-01-01

     
     
Предисловие


Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН группой специалистов Некоммерческой организации "Национальный фонд защиты потребителей" при участии НИИ питания РАМН, ООО "Ред Булл", ООО "ПепсиКо Холдингс", ООО "Хэппилэнд", ООО "Браво-Премиум"

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. N 635-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает методы контроля содержания тонизирующих компонентов и биологически активных веществ, которые обеспечивают функциональное действие напитков безалкогольных тонизирующих и напитков слабоалкогольных тонизирующих.

Настоящий стандарт не распространяется на чай, кофе, безалкогольные напитки на основе чайных и кофейных экстрактов.

Настоящий стандарт устанавливает в напитках безалкогольных тонизирующих и напитках слабоалкогольных тонизирующих следующие методы контроля:

- метод определения кофеина;

- метод определения таурина;

- метод определения глюкуронолактона;

- метод определения инозита;

- метод определения L-карнитина;

- метод определения схизандрина;

- метод определения элеутерозидов;

- метод определения гинсенозидов;

- метод определения витаминов: ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (ниацин), ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (пантотеновая кислота), ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (пиридоксин гидрохлорид).

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4172-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4199-76 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия

ГОСТ 4206-75 Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6687.0-86 Продукция безалкогольной промышленности. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 12069-90 Меры длины штриховые брусковые. Технические условия

ГОСТ 18270-72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 18704-78 Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 19710-83 Этиленгликоль. Технические условия

ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия

ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Отбор проб

3.1 Отбор проб безалкогольных и слабоалкогольных тонизирующих напитков - по ГОСТ 6687.0.

4 Методы определения компонентов

4.1 Метод определения таурина

4.1.1 Сущность метода

Определение таурина основывается на предколоночной дериватизации сортофталевым альдегидом в присутствии меркаптопропионовой кислоты "ОРА" и последующем хроматографическом разделении с помощью обращенно фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ). Детектирование ОРА дериватов проводят на спектрофотометрическом детекторе при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания338 нм или флуорометрическом детекторе при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания340 нм и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания450 нм.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

4.1.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

4.1.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Хроматограф жидкостной, оснащенный насосом высокого давления со скоростью подачи растворителя от 0,1 до 5,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки - 250 мм, диаметр - 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем, размером частиц 5 мкм.

Флуориметрический детектор: спектральный диапазон 200-600 нм, спектр излучения 320-800 нм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы: диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Таурин с массовой долей основного вещества не менее 99,0%.

Бумажные фильтры "синяя лента".

Микрошприц MШ-25 для жидкостной хроматографии.

Ультразвуковая установка с частотой ультразвука 43-45 кГц.

Аппарат для встряхивания проб.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0001 г.

Колбы мерные 2-10-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы химические вместимостью 50 и 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания по ГОСТ 25336.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Виалы (емкости для жидкостных проб) - плоскодонные микропробирки с завинчивающимися крышками объемом 1,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

рН-метр с диапазоном измерений от 2 до 18 ед. рН, погрешность измерений ±0,01 ед. рН.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

О-фталевый альдегид с массовой долей основного вещества не менее 98,0%.

3-меркаптопропионовая кислота с массовой долей основного вещества не менее 99,0%.

Натрия ацетат трехводный х.ч.

Ледяная уксусная кислота х.ч. по ГОСТ 19814.

Соляная кислота концентрированная х.ч. по ГОСТ 3118.

Тетраборат натрия (декагидрат) по ГОСТ 4199.

Метанол ч.д.а. по ГОСТ 6995.

Натрия гидроокись (гидроксид натрия) ч.д.а. по ГОСТ 4328.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.1.4 Приготовление растворов

4.1.4.1 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 0,1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Осторожно помещают 8,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания концентрированной соляной кислоты с плотностью 1,1 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания в мерный стакан вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненный дистиллированной водой. Перемешивают и доводят объем до 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

4.1.4.2 Приготовление раствора уксусной кислоты массовой долей 1%-2%

1-2 г ледяной уксусной кислоты помещают в мерную колбу на 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, наполовину заполненную дистиллированной водой, доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

4.1.4.3 Приготовление подвижной фазы

Для приготовления подвижной фазы А молярной концентрацией 0,02 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания в стакан вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают (1,360±0,025) г три гидроацетата натрия, добавляют 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды, доводят рН до 6,6 (контролируют рН-метром) с помощью раствора уксусной кислоты массовой долей 1%-2%. Полученный раствор фильтруют через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. В качестве подвижной фазы В используют ацетонитрил. Раствор хранят в темном прохладном месте не более трех недель.

4.1.4.4 Приготовление раствора ОРА массовой концентрацией 5 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

150 мг о-фталевого альдегида растворяют в 3 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метанола в мерной колбе вместимостью 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, добавляют 120 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания 3-меркаптопропионовой кислоты и доводят объем до 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания водным раствором боратного буфера молярной концентрацией 0,4 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (0,4 Н) с рН=10,4 (приготовление раствора см. ниже). Раствор хранят в темном прохладном месте не более трех недель.

4.1.4.5 Приготовление раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (1 Н)

Навеску гидроксида натрия массой (4,0±0,1) г растворяют дистиллированной водой, не содержащей углекислого газа, в мерной колбе объемом 1 дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, раствор доводят водой до метки. Раствор можно приготовить из стандарт-титра.

4.1.4.6 Приготовление боратного буфера молярной концентрацией 0,4 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (0,4 Н)

76 г натрия тетрабората (декагидрат) помещают в стакан вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, добавляют 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды и прибавляют раствор гидрооксида натрия молярной концентрацией 1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (1Н) до (10,4+0,05) ед. рН. Полученный раствор фильтруют через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Раствор хранят в темном прохладном месте не более трех недель.

4.1.4.7 Приготовление стандартных градуировочных растворов таурина

Стандартные градуировочные растворы таурина готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы таурина хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску таурина массой 50 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (0,1 Н), перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 1, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 1 - Приготовление стандартных градуировочных растворов таурина

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

100

Навеску таурина массой 50 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (0,1 Н), перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

500

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

200

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

100

4

4

25

Отбирают 0,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

10

Примечание - Раствор N 4 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию таурина в анализируемых пробах.


4.1.5 Подготовка образца к анализу

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают в мерную колбу вместимостью 250 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,1 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (0,1 Н) до метки и тщательно перемешивают. Фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", затем через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.1.6 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.1.6.1 Условия хроматографического анализа

Условия хроматографического анализа:

колонка по 4.1.3.2;

подвижная фаза в процентах по объему: 85% тригидроацетата натрия молярной концентрацией 0,02 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания с рН 6,6 (фаза А) и 15% ацетонитрила (фаза В);

скорость подвижной фазы 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование: УФ ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания338 нм (рефрактометрическое ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания390 нм) и по флуоресценции: при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания340 нм и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания450 нм.

При использовании инжектора предколоночную дериватизацию проводят в виалах, с помощью шприца помещают 50 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания боратного буфера, 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ОРА, 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания подготовленного образца, перемешивают, набирая в шприц и обратно 5-10 раз, и вводят пробу 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. Вводить пробу необходимо сразу же, так как ОРА комплексы не стойкие и разрушаются в течение 2-5 мин.

4.1.6.2 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов таурина.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации таурина в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (1)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (1) следует, что площадь пиков градуировочных растворов таурина ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (2)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mv·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (3)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.1.6.3 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.1.5. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика таурина. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.1.7 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию таурина в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (4)


или по формуле с использованием стандартного градуировочного раствора таурина

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (5)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация таурина в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация таурина в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя способами (программно-аппаратным и расчетным) должны сходиться.

4.1.8 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (6)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (7)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (8)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.1.9 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице 2.


Таблица 2

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 1 до 500 включ.

Св. 500 до 5000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

17

11

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

25

13

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

18

9



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (9)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.1.10 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации таурина

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации таурина при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 2.

4.2 Метод определения глюкуронолактона

4.2.1 Сущность метода

Метод основан на идентификации и количественном определении D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением рефрактометрического и ультрафиолетового детектирования.

4.2.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией. Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.2.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки - 250 мм, диаметр - 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки - 300 мм, диаметр - 7,8 мм, с катионитом в форме СаГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания на основе сульфированного стиролдивинилбензола в ионной кальциевой форме (8%).

Рефрактометрический детектор: предел детектирования по глюкозе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания1·10ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания г.

Термостат колонок: температурный диапазон от 10 °С до 80 °С.

Спектрофотометрический детектор: диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Ультразвуковая установка с частотой ультразвука 43-45 кГц.

Аппарат для встряхивания проб.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Шкаф сушильный, обеспечивающий нагрев до 150 °С.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактон кристаллический с содержанием основного вещества не менее 99,9%.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.2.4 Подготовка к анализу

4.2.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона

Стандартные градуировочные растворы D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона массой 75 мг помещают в мерную колбу вместимостью 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 3, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 3 - Приготовление стандартных градуировочных растворов D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

25

Навеску D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона массой 75 мг помещают в мерную колбу вместимостью 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированой водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

3000

2

2

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

600

3

3

25

Отбирают 2 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

240

4

4

25

Отбирают 0,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

60

Примечание - Раствор N 3 используют в качестве одного из контрольных растворов в текущих анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона в анализируемых пробах.


4.2.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка в 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр с размером пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр.

4.2.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.2.5.1 Приготовление подвижной фазы

550 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтровальную бумагу с диаметром пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в установке для фильтрования растворов.

4.2.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия ВЭЖХ при анализе энергетических напитков:

колонка по 4.2.3.2;

подвижная фаза ацетонитрил-вода (55:45) в процентах по объему;

скорость потока 1,0 см/мин;

детектор спектрофотометрический, длина волны 210 нм;

аликвота, вводимая в инжектор, 10-15 мкл;

ориентировочное время D-глюкуроно--лактона (3,9±0,3) мин.

4.2.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (10)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (10) следует, что площадь пиков градуировочных растворов D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (11)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (12)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.2.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.2.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.2.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (13)


или по формулам с использованием стандартного градуировочного раствора D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (14)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя способами (программно-аппаратным и расчетным) должны сходиться.

4.2.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (15)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (16)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (17)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.2.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице 4.


Таблица 4

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 10 до 1000 включ.

Св. 1000 до 5000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

30

11

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

35

15

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

25

11



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (18)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.2.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации D-глюкуроно-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-лактона при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 4.

4.3 Метод определения инозита

4.3.1 Сущность метода

Метод основан на идентификации и количественном определении инозита с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.3.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.3.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, на основе ковалентной сшивки аминосилана к поверхности силикагеля, размер частиц 5 мкм.

Рефрактометрический детектор: предел детектирования по глюкозе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания1·10ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания г.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Установка для фильтрования растворов.

Шкаф сушильный, обеспечивающий нагрев до 150 °С.

Инозит кристаллический с массовой долей основного вещества не менее 99,0% или по действующей нормативно-технической документации.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.3.4 Приготовление растворов

4.3.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов инозита

Стандартные градуировочные растворы инозита готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы инозита хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску инозита массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 5, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 5 - Приготовление стандартных градуировочных растворов инозита

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

50

Навеску инозита массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированой водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

2000

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

800

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

400

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

80

Примечание - Раствор N 2 используют в качестве одного из контрольных растворов в текущих анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию инозита в анализируемых пробах.


4.3.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка в 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр с размером пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр.

4.3.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.3.5.1 Приготовление подвижной фазы

770 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтровальную бумагу с диаметром пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в установке для фильтрования растворов.

4.3.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия ВЭЖХ:

колонка по 4.3.3.2;

подвижная фаза ацетонитрил-вода (77:23) в процентах по объему,

скорость подвижной фазы 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин,

аликвота, вводимая в инжектор 10-15 мкл.

Ориентировочное время удерживания инозита (10,0±0,2) мин.

4.3.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов инозита.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации инозита в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (19)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (19) следует, что площадь пиков градуировочных растворов инозита ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·c или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (20)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (21)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.3.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.2.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика инозита. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.3.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию инозита в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (22)


или по формулам с использованием стандартного градуировочного раствора инозита

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (23)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация инозита в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация инозита в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя способами (программно-аппаратным и расчетным) должны сходиться.

4.3.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (24)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (25)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (26)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.3.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице 6.


Таблица 6

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 20 до 300 включ.

Св. 300 до 1000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

31

24

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

36

28

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

26

20



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (27)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (5.3.4).

4.3.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации инозита

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации инозита при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 6.

4.4 Метод определения L-карнитина

4.4.1 Сущность метода

Метод основан на идентификации и количественном определении свободного L-карнитина с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением рефрактометрического детектирования.

4.4.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.4.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, на основе ковалентной сшивки аминосилана к поверхности силикагеля, размер частиц 5 мкм.

Рефрактометрический детектор: предел детектирования по глюкозе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания1·10ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания г.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Установка для фильтрования растворов.

Шкаф сушильный, обеспечивающий нагрев до 150 °С.

L-карнитин гидрохлорид кристаллический с массовой долей основного вещества не менее 98,0% или по действующей нормативно-технической документации.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.4.4 Приготовление реактивов

4.4.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов L-карнитина

Стандартные градуировочные растворы L-карнитина готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы L-карнитина хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску L-карнитина массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 7, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 7 - Приготовление стандартных градуировочных растворов L-карнитина

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

100

Навеску L-карнитина массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

1000

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

400

3

3

25

Отбирают 2 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

80

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

40

Примечание - Раствор N 4 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию L-карнитина в анализируемых пробах.


4.4.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка в 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр с размером пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр.

4.4.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.4.5.1 Приготовление подвижной фазы

750 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтровальную бумагу с диаметром пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в установке для фильтрования растворов.

4.4.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия ВЭЖХ:

колонка по 4.4.3.2;

подвижная фаза ацетонитрил-вода (75:25) в процентах по объему;

скорость подвижной фазы 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

объем раствора, вводимого в инжектор 10-15 мкл.

Ориентировочное время удерживания L-карнитина (8,6±0,2) мин.

4.4.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов L-карнитина.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации L-карнитина в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (28)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (28) следует, что площадь пиков градуировочных растворов L-карнитина ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (29)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с].

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (30)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.4.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.4.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика L-карнитина. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.4.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию L-карнитина в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (31)


или по формуле с использованием стандартного градуировочного раствора L-карнитина

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (32)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация L-карнитина в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация L-карнитина в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя методами (программно-аппаратным и расчетным) должны совпадать.

4.4.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (33)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости:

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (34)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (35)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.4.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, с пределом повторяемости, приведенным в таблице 8.


Таблица 8

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 10 до 500 включ.

Св. 500 до 2000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

36

24

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

41

29

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

30

20



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (36)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.4.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации L-карнитина

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации L-карнитина при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 8.

4.5 Метод определения схизандрина

4.5.1 Сущность метода

Определение схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в напитках проводится методом ВЭЖХ с фотометрическим детектированием при длине волны ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания254 нм.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Схизандрин

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-Схизандрин


4.5.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

4.5.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Хроматограф жидкостной, оснащенный насосом высокого давления со скоростью подачи растворителя от 0,1 до 5,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Ультразвуковая установка с частотой ультразвука 43-45 кГц.

Аппарат для встряхивания проб.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,001 г.

рН-метр с диапазоном измерений от минус 2 до 18 ед. рН с абсолютной погрешностью измерений ±0,01 ед. рН.

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Стаканы химические вместимостью 50 и 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания по ГОСТ 25336.

Ацетонитрил для ВЭЖХ ч.

Бумажные фильтры "синяя лента".

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Патрон Диапак С18.

Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Схизандрин с массовой долей основного вещества не менее 98,0%.

Гамма-схизандрин с массовой долей основного вещества не менее 98,0%.

Метанол ч.д.а. по ГОСТ 6995.

Трифторуксусная кислота х.ч. ГОСТ 18270.

4.5.4 Приготовление реактивов

4.5.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина

Стандартные градуировочные растворы схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навески схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 9, помещают их в мерные колбы и доводят метанолом до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 9 - Приготовление стандартных градуировочных растворов схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

50

Навеску схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

200

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

80

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

40

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

8

Примечание - Раствор N 3 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в анализируемых пробах.


4.5.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания наносят на патрон Диапак С18, предварительно активированный 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта и 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Патрон промывают 30 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Схизандрины смывают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", затем через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.5.4.3 Приготовление трифторуксусной кислоты массовой долей 1% - 2%

1-2 г трифторуксусной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, наполовину заполненную дистиллированной водой, доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

4.5.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.5.5.1 Приготовление подвижной фазы

Для приготовления раствора трифторуксусной кислоты с рН 2,5 (подвижная фаза А) 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды помещают в стакан вместимостью 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и доводят рН до 2,5 с помощью трифторуксусной кислоты массовой долей 1%-2%. Полученный раствор фильтруют через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. В качестве подвижной фазы В используют ацетонитрил.

4.5.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия хроматографического анализа:

колонка по 4.5.3.2;

подвижная фаза: ацетонитрил - трифторуксусная кислота рН 2,5 (73:27) в процентах по объему;

скорость подачи элюента: 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование: УФГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания254 нм;

объем пробы 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ориентировочные времена удерживания схизандрина 3,7 и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина 8,8 мин.

4.5.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (37)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (37) следует, что площадь пиков градуировочных растворов схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (38)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (39)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.5.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.5.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пиков схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина. В случае, если площадь пиков выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.5.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (40)


или по формуле с использованием стандартного градуировочного раствора схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (41)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем метилового спирта, которым смыли с патрона образец, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем наносимого на патрон образца напитка, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя методами (программно-аппаратным и расчетным) должны совпадать.

4.5.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (42)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (43)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (44)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.5.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице.

Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (45)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.5.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации схизандрина и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-схизандрина при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 10.


Таблица 10

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 10 до 200 включ.

Св. 200 до 1000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

35

28

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

43

37

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

30

26

4.6 Метод определения элеутерозидов

4.6.1 Сущность метода

Определение элеутерозидов В и Е в напитках проводится методом ВЭЖХ с фотометрическим детектированием при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания215 нм.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Элеутерозид В

Элеутерозид Е

4.6.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

4.6.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Ультразвуковая установка с частотой ультразвука 43-45 кГц.

Аппарат для встряхивания проб.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Бумажные фильтры "синяя лента".

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Патрон Диапак С18.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Элеутерозид В массовой долей основного вещества не менее 96,0%.

Элеутерозид Е массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

Метанол ч.д.а. по ГОСТ 4199.

Ортофосфорная (фосфорная) кислота массовой долей 85% по ГОСТ 6552.

4.6.4 Приготовление реактивов

4.6.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов элеутерозидов Е и В

Стандартные градуировочные растворы элеутерозидов Е и В готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы элеутерозидов Е и В хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навески элеутерозидов Е и В массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 11, помещают их в мерные колбы и доводят метанолом до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 11 - Приготовление стандартных градуировочных растворов

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

50

Навеску элеутерозидов Е и В массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

200

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

80

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

40

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

8

Примечание - Раствор N 3 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию элеутерозидов Е и В в анализируемых пробах.


4.6.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания наносят на патрон Диапак С18, предварительно активированный 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта и 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Патрон промывают 30 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Элеутерозиды смывают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", затем через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.6.4.3 Приготовление раствора 1% - 2% фосфорной кислоты

1-2 г фосфорной кислоты помещают в мерную колбу на 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, наполовину заполненную дистиллированной водой, доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

4.6.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.6.5.1 Приготовление подвижной фазы

Для приготовления раствора фосфорной кислоты с рН 2,5 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды помещают в стакан и доводят рН до 2,5 с помощью 1%-2% ортофосфорной кислоты. Полученный раствор фильтруют через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм (подвижная фаза А). В качестве подвижной фазы В используют ацетонитрил.

4.6.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия хроматографического анализа:

колонка по 4.6.3.2;

подвижная фаза:

Длительность, мин

А

Раствор НГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытанияРОГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания рН=2,5, % по объему

В

Ацетонитрил, % по объему

0

90

10

2

90

10

20

70

30



скорость подачи элюента 0,8 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование УФГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания215 нм;

объем пробы 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ориентировочные времена удерживания элеутерозида В 3,7 мин и элеутерозида Е 8,8 мин.

4.6.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов элеутерозидов.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации элеутерозидов Е и В в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (46)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (46) следует, что площадь пиков градуировочных растворов элеутерозидов Е и В ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (47)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с].

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (48)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.6.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.5.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пиков элеутерозидов. В случае, если площадь пиков выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.6.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию элеутерозидов Е и В в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (49)

или по формуле с использованием стандартных градуировочных растворов элеутерозидов

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (50)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация элеутерозидов Е и В в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем метилового спирта, которым смыли с патрона образец, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем наносимого на патрон образца напитка, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация элеутерозидов Е и В в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя методами (программно-аппаратным и расчетным) должны совпадать.

4.6.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (51)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (52)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (53)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.6.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице 12.


Таблица 12

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 3 до 200 включ.

Св. 200 до 1000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

51

40

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

59

45

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

42

32



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (54)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.6.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации элеутерозидов Е и В

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации элеутерозидов Е и В при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 12.

4.7 Метод определения гинсенозидов

4.7.1 Сущность метода

Определение панаксозидов (гинсенозидов) в напитках проводится методом ВЭЖХ с фотометрическим детектированием при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания203 нм. Для исследования используют следующие панаксозиды:

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания


Название

R

RГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

RbГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

D-Glc-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания2)-D-Glc

D-Glc-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания6)-D-Glc

RbГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

D-Glc-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания2)-D-Glc

L-Аrа(пираноза)(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания6)-D-Glc

Rc

D-Glc-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания2)-D-Glc

L-Аrа(фураноза)(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания6)-D-Glc

Rd

D-Glc-ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания2)-D-Glc

D-Glc

RgГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

D-Glc

D-Glc

Re

L-Rha(1ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания6)-D-Glc

D-Glc


4.7.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

4.7.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы:

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Ультразвуковая установка с частотой ультразвука 43-45 кГц.

Аппарат для встряхивания проб.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Патрон Диапак С18.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Бумажные фильтры "синяя лента".

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Панаксозид Rb1 массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Панаксозид Rb2 массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Панаксозид Rc массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Панаксозид Rd массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Панаксозид Re массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Панаксозид Rg1 массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

4.7.4 Приготовление реактивов

4.7.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов гинсенозидов

Стандартные градуировочные растворы гинсенозидов готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы гинсенозидов хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навески гинсенозидов массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 13, помещают их в мерные колбы и доводят метанолом до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 13 - Приготовление стандартных градуировочных растворов

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

50

Навеску гинсенозидов массой 10 мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

200

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

80

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

40

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят метанолом до метки и тщательно перемешивают

8

Примечание - Раствор N 3 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию гинсенозидов в анализируемых пробах.


4.7.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания наносят на патрон Диапак С18, предварительно активированный 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта и 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Патрон промывают 30 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды. Панаксозиды смывают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метилового спирта. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента", затем через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.7.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.7.5.1 Условия хроматографического анализа

Условия хроматографического анализа:

колонка по 4.7.3.2;

подвижная фаза:

Длительность, мин

Дистиллированная вода, % по объему

Ацетонитрил, % по объему

0

90

10

20

75

25

60

40

60



скорость подачи элюента: 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование: УФГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания215 нм;

объем пробы 10 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ориентировочные времена удерживания панаксозидов: Rg1 - 24,3; Re - 24,7; Rb1 - 34,5; Rc - 35,5; Rb2 - 36,5; Rd - 38,0 мин.

4.7.5.2 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов гинсенозидов.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации гинсенозидов в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (55)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (55) следует, что площадь пиков градуировочных растворов гинсенозидов ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (56)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (57)


ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.7.5.3 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.7.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пиков гинсенозидов. В случае, если площадь пиков выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую менее или более разбавленную пробу и анализ повторяют.

4.7.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию гинсенозидов в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (58)


или по формуле с использованием стандартных градуировочных растворов гинсенозидов

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (50)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация гинсенозида в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем метилового спирта, которым смыли с патрона образец, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем наносимого на патрон образца напитка, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация гинсенозида в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя методами (программно-аппаратным и расчетным) должны совпадать.

4.7.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (60)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (61)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (62)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.7.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости с пределом повторяемости, приведенным в таблице 14.


Таблица 14

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 3 до 200 включ.

Св. 200 до 1000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

52

40

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

61

47

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

43

34



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (63)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.7.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации гинсенозидов

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации гинсенозидов при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 14.

4.8 Метод определения кофеина

4.8.1 Сущность метода

Метод основан на идентификации и количественном определении кофеина (пуринового алкалоида) с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением ультрафиолетового детектирования.

4.8.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.8.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 250 мм, диаметр 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Ледяная уксусная кислота х.ч. по ГОСТ 19814.

Шкаф сушильный, обеспечивающий нагрев до 150 °С.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Бумага фильтровальная с размером пор 0,5 мкм по ГОСТ 12069.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Установка для фильтрования растворов.

Кофеин (1,3,7-триметилксантин) кристаллический массовой долей основного вещества не менее 99,0% или по действующей нормативно-технической документации.

4.8.4 Приготовление растворов

4.8.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов кофеина

Стандартные градуировочные растворы кофеина готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы кофеина хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску кофеина массой 40 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуровочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 15, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 15 - Приготовление стандартных градуировочных растворов кофеина

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

100

Навеску кофеина массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированной водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

400

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

160

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

80

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

16

Примечание - Раствор N 2 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию кофеина в анализируемых пробах.


4.8.4.2 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка в 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают в мерную колбу вместимостью 250 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и отфильтровывают через бумажный фильтр с размером пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

4.8.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.8.5.1 Приготовление подвижной фазы

150 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, добавляют 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания уксусной кислоты, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через фильтровальную бумагу с диаметром пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

4.8.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия ВЭЖХ для анализа кофеина:

подвижная фаза ацетонитрил: дистиллированная вода: уксусная кислота (15:84:1) в процентах по объему;

колонка по 4.8.3.2;

скорость потока 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование: УФ при длине волны ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания272 нм;

вводимый объем пробы 10,0 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ориентировочное время удерживания кофеина (9,8±0,2) мин.

4.8.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов кофеина.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации кофеина в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (64)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (64) следует, что площадь пиков градуировочных растворов кофеина ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (65)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (66)


ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.8.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.8.4.2. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика кофеина. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую, менее или более разбавленную пробу, и анализ повторяют.

4.8.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию кофеина в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (67)


или по формуле с использованием стандартного градуировочного раствора кофеина

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (68)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация кофеина в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с];

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация кофеина в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя способами (программно-аппаратным и расчетным) должны сходиться.

4.8.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (69)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (70)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (71)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.8.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, с пределом повторяемости, приведенным в таблице 16.


Таблица 16

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 1 до 200 включ.

Св. 200 до 5000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

27

18

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

33

20

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

24

14



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (72)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.8.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации кофеина

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации кофеина при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 16.

4.9 Метод определения витамина В(3) (ниацина)

     4.9 Метод определения витамина ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (ниацина)

4.9.1 Сущность метода

Метод основан на идентификации и количественном определении витамина В3 (ниацина) с помощью метода ион-парной ВЭЖХ в изократическом режиме со спектрофотометрическим детектированием.

4.9.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.9.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0,1 до 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин.

Хроматографическая аналитическая колонка: длина колонки 150 мм, диаметр 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм.

Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до 950 нм.

Микрошприц МШ-25 для жидкостной хроматографии.

Баня водяная с терморегулятором с погрешностью ±1 °С в интервале температур от 25 °С до 100 °C.

Соляная кислота, концентированная, х.ч. по ГОСТ 3118.

Гептилсульфонат натрия массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Ниацин ч.д.а. по [1].

Ледяная уксусная кислота х.ч. по ГОСТ 19814.

Триэтиламин.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Метанол ч.д.а. по ГОСТ 6995.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Соляная кислота, концентрированная х.ч. по ГОСТ 3118.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.9.4 Приготовление реактивов

4.9.4.1 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

К 400 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды добавляют 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания концентрированной соляной кислоты (плотностью 1,19 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания), объем раствора доводят до метки в мерной колбе вместимостью 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

4.9.4.2 Приготовление стандартных градуировочных растворов ниацина

Стандартные градуировочные растворы ниацина готовят для расчета градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного раствора N 1.

Стандартные градуировочные растворы ниацина хранят не более трех месяцев.

Для приготовления градуировочного раствора N 1 (основного) навеску ниацина массой 20 мг количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, растворяют в растворе соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и доводят объем этим же раствором до метки. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Приготовленный раствор можно хранить в холодильнике в течение 2-3 мес.

Для приготовления градуировочных растворов NN 2-4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1 в соответствии с таблицей 17, помещают их в мерные колбы и доводят раствором соляной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания до метки, тщательно перемешивая.


Таблица 17 - Приготовление стандартных градуировочных растворов ниацина

N п/п

N стандартного раствора

Вместимость мерной колбы, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Способ приготовления

Массовая концентрация, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1

1 (основной)

100

Навеску ниацина массой 100 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненную дистиллированой водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемешивают

200

2

2

25

Отбирают 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

80

3

3

25

Отбирают 5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

40

4

4

25

Отбирают 1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора N 1, переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают

8

Примечание - Раствор N 2 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных анализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию ниацина в анализируемых пробах.


4.9.4.3 Подготовка образца

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Аликвоту напитка в 50 см* помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и отфильтровывают через бумажный фильтр с размером пор 0,5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
_______________
* Соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

4.9.5 Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.9.5.1 Приготовление подвижной фазы

В мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания добавляют 150-200 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды, 2 г гептилсульфоната натрия, 150 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания метанола, 10 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ледяной уксусной кислоты, 0,4 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания триэтиламина и доводят объем до метки дистиллированной водой, раствор тщательно перемешивают.

4.9.5.2 Условия хроматографического анализа

Условия ВЭЖХ для анализа ниацина:

подвижная фаза метанол: ледяная уксусная кислота: вода (15:1:84), об. %, содержащая 0,01 моль гептилсульфоната натрия;

колонка по 4.9.3.2;

скорость потока 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/мин;

детектирование: УФ при длине волны ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания262 нм;

вводимый объем образца 10,0 ммГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ориентировочное время удерживания ниацина (8,0±0,5) мин.

4.9.5.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов ниацина.

Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации ниацина в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением.

Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (73)


Правильность построения градуировочной зависимости контролируется величиной достоверности аппроксимации (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания)

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.


Из уравнения (73) следует, что площадь пиков градуировочных растворов ниацина ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (mV·с или V·с) и их массовая концентрация ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) находятся в соответствующей функциональной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (74)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с]ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (75)


ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, mAU·с или AU·c;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация соответствующего вещества при анализе ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания-го стандартного раствора, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Градуировочную зависимость строят при смене хроматографа, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

4.9.5.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ подготовленных проб по 4.9.4.3. Каждую пробу продукта анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 (подраздел 3.14) и ГОСТ Р ИСО 5725-2. Регистрируют площадь пика ниацина. В случае, если площадь пика выходит за границы диапазона градуировки хроматографа, готовят новую, менее или более разбавленную пробу, и анализ повторяют.

4.9.6 Обработка результатов определения

Массовую концентрацию ниацина в пробе продукта рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения. Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

Обработку хроматограмм и расчет количественных характеристик проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (76)


или по формуле с использованием стандартного градуировочного раствора ниацина

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (77)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация ниацина в анализируемой пробе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества, mV·с или V·с;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - градуировочный коэффициент, [мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания/mV·с];

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - объем пробы, отобранный для измерения, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация ниацина в стандартном растворе, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - площадь пика анализируемого вещества в стандартном растворе, mV·с или V·с.

Результаты обработки двумя способами (программно-аппаратным и расчетным) должны сходиться.

4.9.7 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (78)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (79)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (80)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.9.8 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, с пределом повторяемости, приведенным в таблице 18.


Таблица 18

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 2 до 200 включ.

Св. 200 до 2000

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

35

26

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

44

35

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

31

25



Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (81)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.9.9 Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации ниацина

Показатели точности и прецизионности измерений массовой концентрации ниацина при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 18.

4.10 Метод определения витамина В(5) (пантотеновой кислоты)

     4.10 Метод определения витамина ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (пантотеновой кислоты)

4.10.1 Сущность метода

Метод основан на колориметрическом определении по реакции пантотеновой кислоты с 2,5-диметокситетрагидрофураном и 4-диметиламинобензальдегидом.

4.10.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.10.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

4-Диметиламинобензальдегид массовой долей основного вещества не менее 99,0%.

Пантотеновая кислота массовой долей основного вещества не менее 98,0%.

Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длинах волн от ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания200 нм до ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания900 нм, с допускаемой абсолютной погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1%.

Катионит в Н-форме.

Баня водяная с терморегулятором с погрешностью 1 °С в интервале температур от 25 °С до 100 °С.

Соляная кислота концентрированная х.ч. по ГОСТ 3118.

Ледяная уксусная кислота х.ч. по ГОСТ 19814.

2,5-Диметокситетрагидрофуран массовой долей основного вещества не менее 95,0%.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами абсолютной допускаемой погрешности однократного взвешивания не более ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Натрия гидроокись ч.д.а. по ГОСТ 4328.

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N'N'-тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б, ЭДТА) по ГОСТ 10652.

Пропиленгликоль по ГОСТ 19710.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Спирт изобутиловый ч.д.а. по ГОСТ 6061.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Стакан фарфоровый 150 по ГОСТ 9147.

Колба коническая КН-1-100-14/23 по ГОСТ 25336.

Шейкер лабораторный ЛАБ-ПУ-04.

Центрифуга лабораторная с величиной фактора разделения (g-фактор) 800-1500.

Термометр стеклянный ртутный с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С.

Стаканы химические вместимостью 50 и 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания по ГОСТ 25336.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.10.4 Приготовление растворов

4.10.4.1 Приготовление раствора гидроокиси натрия массовой концентрацией 0,01 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1,0 г гидроокиси натрия растворяют в 20-40 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды в фарфоровом стакане, переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.

4.10.4.2 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 0,01 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Осторожно помещают 8,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания концентрированной соляной кислоты с плотностью 1,1 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания в мерный стакан вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, до половины заполненный дистиллированной водой. Перемешивают и доводят объем до 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

4.10.4.3 Приготовление реагента I

0,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания 2,5-диметокситетрагидрофурана помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, добавляют 40 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания ледяной уксусной кислоты, 40 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания изобутилового спирта, доводят объем до метки ледяной уксусной кислотой и перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед проведением испытания.

4.10.4.4 Приготовление реагента II

Точную навеску 4-диметиламинобензальдегида 5 г в мерной колбе вместимостью 250 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания растворяют в 20 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,01 моль/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем до метки ледяной уксусной кислотой и перемешивают.

4.10.4.5 Приготовление стандартного раствора пантотеновой кислоты с массовой концентрацией 1,0 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Навеску пантотеновой кислоты массой 100 мг количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем дистиллированной водой до метки. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Приготовленный раствор можно хранить в холодильнике в течение двух-трех месяцев.

4.10.5 Приготовление рабочего стандартного раствора пантотеновой кислоты

Для приготовления рабочего стандартного раствора в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают аликвоту 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора пантотеновой кислоты массовой концентрацией 1,0 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и доводят объем до метки дистиллированной водой. Массовая концентрация рабочего стандартного раствора пантотеновой кислоты составляет 0,01 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

4.10.6 Подготовка к анализу

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания полученного раствора используют для проведения калориметрической реакции.

4.10.7 Проведение анализа

В конические колбы вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания помещают по 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания стандартного рабочего раствора и испытуемого образца, добавляют по 2,0 г катионита в каждую и интенсивно перемешивают на шейкере в течение 10 мин. Затем полученные смеси центрифугируют в течение 5 мин при 1500g. Полученный супернатант используют в ходе дальнейшего исследования.

Аликвоты стандартного рабочего раствора (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) пантотеновой кислоты и испытуемого образца (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) помещают в мерные колбы вместимостью 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Состав исследуемых проб и порядок добавления к ним реагентов приведены в таблице 19.


Таблица 19

Реагент

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Контроль

Объем стандартного рабочего раствора пантотеновой кислоты, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

5,0

-

-

Объем испытуемого образца, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

-

5,0

-

Объем дистиллированной воды, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

-

-

5,0

Объем раствора гидроокиси натрия массовой концентрацией 0,01 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

5,0

5,0

5,0



Колбы закрывают пробками и помещают в баню с пропиленгликолем при температуре 85 °С на 15 мин, добавляют в каждую колбу 5,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора реагента I и быстро перемешивают, не вынимая колбы из бани. Через 10 мин после добавления реагента колбы вынимают, тщательно вытирают и помещают в водяную баню при температуре 20 °С. Доводят объем до метки в каждой колбе раствором реагента II. Через 15 мин колбы вынимают и измеряют оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре при длине волны ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания560 нм, используя в качестве контроля смесь дистиллированной воды и раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 0,01 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания в соотношении 1:1.

4.10.8 Обработка результатов

Массовую концентрацию пантотеновой кислоты в напитке ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитывают по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (82)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность испытуемого раствора;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность стандартного рабочего раствора пантотеновой кислоты;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация стандартного рабочего раствора, мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - коэффициент пересчета смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания на дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Вычисления проводят до второго десятичного знака.

4.10.9 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (83)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (84)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (85)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.10.10 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, с пределом повторяемости, приведенным в таблице.

Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (86)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.10.11 Показатели точности и прецизионности массовой концентрации измерений пантотеновой кислоты

Показатели точности и прецизионности измерений пантотеновой кислоты в диапазоне измерений от 5 до 50 мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 20.


Таблица 20

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 5 до 50

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

43

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

56

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

40

4.11 Метод определения витамина В(6) (пиридоксина гидрохлорида)

     4.11 Метод определения витамина ВГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания (пиридоксина гидрохлорида)

4.11.1 Сущность метода

Метод основан на колориметрическом определении по реакции пиридоксина гидрохлорида с N-диэтилпарафенилендиамином.

4.11.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха

от 10 °С до 35 °С;

относительная влажность воздуха

от 40% до 95%;

напряжение в электросети

220ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания В.


Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.11.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Пробирки стеклянные центрифужные вместимостью до 35 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания с плотными пробками.

рН-метр с диапазоном измерений рН от 2 до 18; погрешность измерений ±0,01 ед. рН.

Спектрофотометр, обеспечивающий измерения при длинах волн от 200 до 900 нм с допускаемой абсолютной погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1%.

Стакан фарфоровый вместимостью 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания по ГОСТ 9147.

Баня водяная с терморегулятором с погрешностью 1 °С в интервале температур от 25 °С до 100 °С.

Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.

N,N-диэтилпарафинилендиамин сернокислый с содержанием основного вещества не менее 90%.

Калий железосинеродистый ч.д.а. по ГОСТ 4206.

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0001 г.

Колбы мерные наливные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 4-1-2-2 или 5-1-2-2, 4-2-2-10 или 5-2-2-10, 4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Натрия гидроокись ч.д.а. по ГОСТ 4328.

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N'N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б, ЭДТА) по ГОСТ 10652.

Калий фосфорнокислый однозамещенный ч.д.а. по ГОСТ 4198.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Кислота борная по ГОСТ 18704.

Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.

Капроновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Соляная кислота, концентрированная, квалификации х.ч. по ГОСТ 3118.

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 2-водный ч.д.а. по ГОСТ 4172.

Пиридоксин гидрохлорид с содержанием основного вещества не менее 95%.

Толуол ч.д.а. по ГОСТ 5789.

Стаканы химические вместимостью 50 и 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания по ГОСТ 25336.

Шейкер лабораторный ЛАБ-ПУ-04.

Центрифуга лабораторная с величиной фактора разделения (g-фактор) 800-1500.

Кварцевая кювета вместимостью 3,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и длиной оптического пути 1,0 см по ГОСТ 20903.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по классу чистоты не ниже вышеуказанных.

4.11.4 Приготовление растворов

4.11.4.1 Приготовление фосфатного буфера I

11,88 г натрия фосфорнокислого двухзамещенного дигидрата растворяют в 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят водой объем до метки и перемешивают.

4.11.4.2 Приготовление фосфатного буфера II

9,08 г калия фосфорнокислого однозамещенного растворяют в 500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят водой объем до метки и перемешивают.

4.11.4.3 Приготовление раствора железосинеродистого калия массовой концентрации 0,05 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1,25 г железосинеродистого калия растворяют в 10-15 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 25 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем этим же растворителем до метки и перемешивают. Раствор хранят в темном месте не более трех часов.

4.11.4.4 Приготовление стандартного раствора пиридоксина гидрохлорида с массовой концентрацией 1,0 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Навеску пиридоксина гидрохлорида массой 100 мг, высушенного в эксикаторе над фосфорным ангидридом в течение 10 сут, растворяют в 20-30 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем водой и перемешивают. Раствор хранят в холодильнике в течение двух месяцев.

4.11.4.5 Приготовление раствора N,N-диэтилпарафенилендиамина массовой концентрацией 0,01 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Навеску N,N-диэтилпарафенилендиамина массой 100,0 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают. Для предотвращения разрушения N,N-диэтилпарафенилендиамина под действием света раствор готовят непосредственно перед использованием.

4.11.4.6 Приготовление фосфатного буфера рН 7,0

500 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания фосфатного буфера I переносят в стакан вместимостью 1000 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, добавляют приблизительно 250 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания фосфатного буфера II и доводят рН до значения 7,0 ед. рН.

4.11.4.7 Приготовление раствора борной кислоты массовой концентрацией 0,05 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

5,0 г кристаллической борной кислоты растворяют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, доводят объем до метки водой и перемешивают.

4.11.5 Приготовление рабочего стандартного раствора пиридоксина гидрохлорида

1 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания полученного стандартного раствора пиридоксина гидрохлорида массовой концентрацией 1,0 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания пипеткой переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и доводят объем до метки дистиллированной водой. Массовая концентрация рабочего стандартного раствора пиридоксина гидрохлорида составляет 0,01 мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

4.11.6 Подготовка к анализу

Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и удаляют газ в токе азота. Для проведения колориметрической реакции используют 2 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания подготовленной пробы напитка.

4.11.7 Проведение анализа

Колориметрическую реакцию стандартного рабочего раствора (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) и испытуемого образца (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) проводят в центрифужных пробирках с пробками. Состав исследуемых проб и порядок добавления к ним реагентов приведены в таблице 21.


Таблица 21

Реагент

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Контроль

Дистиллированная вода, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

-

-

2,0

Экстракт испытуемого образца, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

-

2,0

-

Стандартный рабочий раствор пиридоксина гидрохлорида, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

2,0

-

-

Фосфатный буфер рН 7,0, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

10,0

10,0

10,0

Раствор диэтилпарафенилендиамина массовой концентрации 0,01 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1,0

1,0

1,0

Толуол, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

10,0

10,0

10,0

Раствор железосинеродистого калия массовой концентрации 0,05 г/ смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

1,0

1,0

1,0



При добавлении раствора N,N-диэтилпарафенилендиамина содержимое каждой пробирки быстро перемешивают на шейкере в течение 30 с, после чего пробирки центрифугируют в течение 2 мин при 1500 g для более четкого разделения органической и водной фаз.

Для проведения колориметической реакции в каждую пробирку быстро добавляют 1,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора железосинеродистого калия с массовой концентрацией 0,05 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, интенсивно перемешивают в течение 30 с и центрифугируют в течение 2 мин при 1500 g до четкого разделения органического и водного слоев.

Пипеткой переносят 2,5 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания толуольного слоя, окрашенного в синий цвет, в кварцевую кювету вместимостью 3,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и длиной оптического пути 1,0 см. Оптическую плотность измеряют при длине волны ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания605 нм, используя в качестве контроля толуольный слой контрольной пробы.

Для устранения мешающего влияния примесей, поглощающих при данной длине волны, 5,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания образца (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) и стандартного рабочего раствора (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) смешивают с 5,0 смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания раствора борной кислоты с массовой концентрацией 0,05 г/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, встряхивают в течение 1 мин на шейкере, центрифугируют при 1500 g и измеряют оптическую плотность, как описано выше. При расчете полученные таким образом оптические плотности (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания и ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания) вычитают из полученных выше соответственно. После каждого измерения кювету немедленно промывают толуолом.

4.11.8 Обработка результатов

Массовую концентрацию пиридоксина гидрохлорида в напитке ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитывают по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (87)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность анализируемой пробы;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность испытуемого раствора после реакции с борной кислотой;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность стандартного рабочего раствора пиридоксина гидрохлорида;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - оптическая плотность стандартного рабочего раствора после реакции с борной кислотой;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - массовая концентрация стандартного рабочего раствора, мг/смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - коэффициент пересчета смГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания на дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

Вычисления проводят до второго десятичного знака.

4.11.9 Оформление результатов измерений

За окончательный результат измерений принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (88)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - результаты параллельных определений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела повторяемости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (89)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое двух результатов измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - значение предела воспроизводимости (в процентах от среднеарифметического значения), приведенное в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95.

При соблюдении условий, регламентированных методиками (методами) измерений настоящего стандарта, при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 относительная погрешность измерений ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания% не должна превышать значений, приведенных в таблицах метрологических характеристик для каждой методики (метода) измерений.

Результат анализа представляют в виде

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95,


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания;

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - абсолютная погрешность измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, рассчитанная по формуле

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, (90)


где ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания - границы относительной погрешности методики (метода) измерений, % (значения приведены в таблицах метрологических характеристик для каждой методики при вероятности ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95).

4.11.10 Контроль повторяемости (сходимости) результатов измерений проводят путем сравнения абсолютного расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, с пределом повторяемости, приведенным в таблице.

Сходимость результатов признают удовлетворительной при условии

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания. (91)


При превышении норматива контроля повторяемости (сходимости) измерения повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

4.11.11 Показатели точности и прецизионности измерений пиридоксина гидрохлорида, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Показатели точности и прецизионности измерений пиридоксина гидрохлорида в диапазоне измерений от 5 до 50 мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания при ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95 приведены в таблице 22.


Таблица 22

Метрологическая характеристика (ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания0,95)

Значение

Диапазон измерений, мг/дмГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

От 5 до 50 включ.

Предел повторяемости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

26

Предел воспроизводимости ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

35

Границы относительной погрешности ±ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания, %

25

Библиография


[1] Госфармакопея, XI издание, вып.2



Электронный текст документа
подготовлен ЗАО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2010

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Название документа: ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания

Номер документа: 53185-2008

Вид документа: ГОСТ Р

Принявший орган: Росстандарт

Статус: Действующий

Опубликован: официальное издание

М.: Стандартинформ, 2010 год

Дата принятия: 18 декабря 2008

Дата начала действия: 01 января 2010
ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или