ГОСТ Р 53912-2010 Продукты пищевые. Экспресс-метод определения антибиотиков (с Поправкой)

     5 Проведение исследования

5.1 Отбор проб продукции

Отбор проб - по ГОСТ Р 53430, ГОСТ 13928, ГОСТ 26668, ГОСТ 26669, ГОСТ 26809.

5.1.1 Подготовка проб к исследованию

5.1.1.1 Молоко и сливки жидкие (в сыром или пастеризованном виде)

Сырое молоко исследуют непосредственно в день отбора проб. До начала анализа пробы молока и сливок хранят в холодильнике при температуре (4±1) °С. Затем отбирают пробу для анализа (не менее 10 см) и помещают ее в пробирку.

5.1.1.2 Сухие молочные продукты (сухое молоко, сухие сливки, сухие детские молочные продукты, изготовленные на основе коровьего молока)

Непосредственно перед исследованием продукт подвергают восстановлению в кипяченой воде при температуре не более (45±1) °С. Пробу тщательно перемешивают, она не должна содержать нерастворенных частиц или комков. Из восстановленного продукта отбирают пробу для анализа в объеме не менее 10 см и переносят ее в пробирку.

5.1.1.3 Яйца, меланж

Яйца или меланж, предназначенные для исследования, предварительно нагревают на водяной бане при температуре (65±1) °С в течение 10-15 мин до коагуляции белка, затем содержимое яиц или меланж тщательно перемешивают и отбирают пробу для анализа массой не менее 10 г.

5.1.1.4 Мясо и субпродукты

Мясо и субпродукты (печень, почки, язык и т.д.) скота и птицы, предназначенные для исследования, измельчают ножницами или при помощи мясорубки или гомогенизатора, затем 10 г пробы мышечной ткани помещают в чашку Петри и дают стечь тканевому соку. Тканевый сок в объеме не менее 10 см переносят в пробирку.

5.1.2 Термическая обработка проб пищевых продуктов

Перед проведением исследования пробирку с пробой, отобранной по 5.1.1, помещают в водяную баню с температурой (60±1) °С. Время прогревания 30 мин отмечают от момента достижения постоянной температуры внутри пробирки.

5.1.3 Тест-культуры для определения антибиотиков

Тест-культурами служат вегетативные формы спорообразующих и неспорообразующих культур: Bacillus subtilis, вар. 6633; Bacillus subtilis, вар. L2; Bacillus mycoides 537; Micrococcus luteum ATCC 9341, обладающих высокой чувствительностью к антибиотикам.

Для пенициллина и стрептомицина используют следующие тест-культуры - Bacillus subtilis, вар. 6633; Basillus mycoides 537 и Micrococcus luteum ATCC 9341, для тетрациклина - Bacillus subtilis, вар. L2.

Музейные штаммы вегетативных форм тест-культур хранят в пробирке со столбиком полужидкого 0,4%-го питательного агара.

5.1.3.1 Приготовление тест-культур

Вначале тест-культуру рассеивают на чашки Петри с 2%-ным мясо-пептонным агаром для получения отдельных колоний. Чашки ставят на (20±3) ч в термостат при температуре (37±1) °С. После чего мелкие колонии отсевают в пробирки с 2%-ным мясо-пептонным скошенным агаром и вновь инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С в течение (20±3) ч.

Микробную взвесь готовят путем смыва физиологическим раствором суточной культуры со скошенного агара. Важно, чтобы смыв культур был абсолютно гомогенным и не содержал комочков.

Срок хранения полученной взвеси в холодильнике при температуре (4±1) °С - 7 дн.

5.1.3.2 "Рабочая доза" тест-культур

"Рабочая доза" тест-культуры - наибольшее разведение суспензии, вызывающее обесцвечивание метиленового синего в определенное время в термостате при температуре (37±1) °С. При этом учитывают, что время обесцвечивания метиленового синего обратно пропорционально количеству клеток тест-культуры в смыве. Время постановки реакции равно одному часу. Оно выявляет в суспензиях различной плотности одну и ту же клеточную нагрузку для каждой тест-культуры. "Рабочую дозу" тест-культур устанавливают по дегидрогеназной активности клеток.

5.1.3.3 Приготовление "рабочей дозы" тест-культуры

Полученную взвесь тест-культуры (5.1.3.1) титруют путем последовательных разведений в 1 см питательного бульона в соотношении 1:2. Пробирки с тест-культурой встряхивают и помещают на 3 ч в термостат при температуре (37±1) °С. Затем для создания условий, близких к анаэробным, в каждую пробирку вносят по 2 см растопленного и охлажденного до температуры (45±1) °С 1%-ного питательного агара с метиленовым синим и глюкозой (оба ингредиента асептично вносят в растопленный 1%-ный питательный агар из расчета: на 100 см среды 0,4 см 0,5-ного* водного раствора метиленового синего и 1 см 40%-ного раствора глюкозы). Пробирки встряхивают и вновь инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С в течение 1-2 ч, после чего учитывают результат (таблица 1).

_________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.     

Таблица 1 - Определение "рабочей дозы" тест-культур