ГОСТ Р 53944-2010 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы микробиологического анализа

     7 Метод выявления и определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

7.1 Сущность метода

Метод основан на высеве определенного количества продукта в плотные культуральные среды, аэробном культивировании посевов при температуре (30±1)°С в течение (72±3) ч, подсчете всех выросших видимых колоний и определении количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 см (г) продукта.

7.2 Проведение анализа

Из навески подготовленной пробы продукта (см. 6.1) готовят исходное и ряд 10-кратных разведений (см. 6.2) до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 см (г) яичного продукта.

Посевы проводят глубинным агаровым методом. Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки Петри маркером ставят номер исследуемого образца продукта, разведение и дату. Высевают одновременно в две чашки Петри (параллельные определения) по 1 см соответствующих последовательных разведений. Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, не касаясь концом пипетки дна чашки.

В каждую чашку Петри с посевным материалом не позднее чем через 15 мин добавляют (18±2) см одной из агаризованных расплавленных и охлажденных до температуры (45±1)°С культуральных сред (питательного, мясо-пептонного агара, ГРМ-агара или др.). Чашки с посевами, залитыми питательной средой, осторожно покачивают или вращают для равномерного распределения посевного материала во всей питательной среде.

Чашки Петри с посевами расставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания культуральной среды.

Для предотвращения роста микроорганизмов, образующих налеты на поверхности среды (ползучий рост), в чашки Петри с посевным материалом наливают (13±2) см выбранной культуральной среды, перемешивают и после застывания на нее наливают без перемешивания второй слой - (5±2) см этой же разогретой и охлажденной до температуры (45±1)°С культуральной среды.

После застывания среды чашки с посевами, перевернутые дном вверх, культивируют в термостате при температуре (30±1)°С в течение (72±3) ч. Допускается предварительный учет количества выросших колоний через (48±1) ч с последующим окончательным учетом еще через (24±1) ч. Чашки Петри с посевами распределяют в термостате по ГОСТ Р ИСО 7218.

7.3 Обработка результатов

7.3.1 Результаты анализа оценивают по каждой пробе отдельно.

Подсчет микроорганизмов проводят по ГОСТ Р ИСО 7218. Подсчет проводят в посевах того разведения, количество колоний в котором не более 300.

Для получения достоверных результатов при подсчете количества колоний необходимо, чтобы хотя бы в одной чашке содержалось не менее 15 колоний.

7.3.2 Количество микроорганизмов в 1 см (г) продукта вычисляют как средневзвешенное значение из подсчетов двух последовательных разведений по формуле

,                                                  (1)

где - сумма колоний, подсчитанных на всех чашках в двух последовательных разведениях, из которых хотя бы в одной из них содержалось не менее 15 колоний;

- объем посевного материала, внесенного в чашку, см;

- количество отобранных для подсчета чашек первого выбранного разведения;

- количество отобранных для подсчета чашек последующего разведения;

- коэффициент разбавления, соответствующий первому выбранному разведению.

Пример

.

Результаты вычисления округляют. Для этого, если последняя цифра меньше пяти, предшествующую цифру не изменяют; если последняя цифра равна или больше пяти, предшествующую цифру увеличивают на единицу. Округление проводят поэтапно, до двух значащих цифр.     

Результаты подсчета количества микроорганизмов в 1 см (г) продукта выражают числом КОЕ от 1,0 до 9,9, умноженным на 10 в соответствующей степени, и записывают следующим образом: КМАФАнМ: Nx10 КОЕ/ в 1 см (г).

Если в чашках на уровне исходной пробы продукта не содержится ни одной колонии, то результат выражают: меньше чем 1,0х10 микроорганизмов в 1 см (г) продукта и записывают как КМАФАнМ: <10 КОЕ/см(г).

7.3.3 Допускается для целей экспрессного выявления и определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов использовать следующее: подложки или пластины в виде подготовленной тест-системы, содержащей набор питательных веществ; бактериологические анализаторы, основанные на оптико-электронном принципе, и другие методы, зарегистрированные и разрешенные к применению в Российской Федерации. Проведение анализа и учет результатов с использованием таких методов проводят по методическим инструкциям, утвержденным в установленном порядке.