• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
0 %
Начинаю
Завершаю


ГОСТ Р ЕН 14130-2010

Группа Н09

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of vitamin C by HPLC

ОКС 67.050
ОКСТУ 9109

Дата введения 2012-01-01

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ГНУ ВНИИКОП) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки фруктов, овощей и грибов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 ноября 2010 г. N 542-ст

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту ЕН 14130:2003* "Продукты пищевые. Определение витамина С. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии" (EN 14130:2003 "Foodstuffs - Determination of vitamin C by HPLC").
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (пункт 3.5).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения
     

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения витамина С с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание витамина С определяется в виде суммарного содержания L(+)-аскорбиновой и L(+)-дегидроаскорбиновой кислот.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт:

ЕН ИСО 3696 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний (ИСО 3696:1987)

3 Сущность метода

Метод основан на экстракции витамина С из пробы раствором метафосфорной кислоты, последующем восстановлении L(+)-дегидроаскорбиновой кислоты до L(+)-аскорбиновой кислоты и определении общего содержания L(+)-аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 265 нм [1], [2].

4 Реактивы

4.1 Общие положения

При проведении анализа, если не оговорены другие условия, используют только реактивы установленной аналитической чистоты для ВЭЖХ-анализа и воду не ниже первой степени чистоты по ЕН ИСО 3696 или воду, подвергнутую дополнительной дистилляции.

4.2 Реактивы и растворы

4.2.1 Кислота метафосфорная (НРОГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.2.2 Натрий фосфорнокислый трехзамещенный (тринатрийфосфат) с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(NaГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииPOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии·12НГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииО)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии98,0%.

4.2.3 Калий фосфорнокислый однозамещенный с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(KHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииPOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии98,0%.

4.2.4 L-цистеин с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииNOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииS)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии99,0% или другой приемлемый восстанавливающий реактив.

4.2.5 N-цетил-N,N,N-триметиламмонийбромид (цетримид) с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииBrN) ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии99,0%.

4.2.6 Метанол для ВЭЖХ с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииO) ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии99,9%.

4.2.7 Раствор метафосфорной кислоты массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии((НРОГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=200 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

200 г метафосфорной кислоты (см. 4.2.1) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого доводят водой до метки. Срок годности раствора 1 мес при температуре 4 °С.

4.2.8 Раствор метафосфорной кислоты массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии((НРОГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=20 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

50 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии метафосфорной кислоты (см. 4.2.7) переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 500 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого доводят водой до метки. Раствор готовят в день проведения анализа.

4.2.9 Раствор натрия фосфорнокислого трехзамещенного массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(NaГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииPOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии·12НГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииО)=200 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

200 г тринатрийфосфата (см. 4.2.2) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого доводят водой до метки.

4.2.10 Раствор L-цистеина массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииNOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииS)=40 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

20 г цистеина (см. 4.2.4) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 500 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого доводят водой до метки. Раствор готовят в день проведения анализа.

4.2.11 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Раствор А

13,6 г однозамещенного фосфата калия (см. 4.2.3) растворяют в стакане в 900 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии воды. Раствор фильтруют через мембранный фильтр размером пор 0,45 мкм.

Раствор В

100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии цетримида (см. 4.2.5) растворяют в стакане в 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии метанола (см. 4.2.6). Раствор фильтруют через мембранный фильтр размером пор 0,45 мкм.

Приготовленные растворы смешивают, используя 900 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора А и 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора В. Полученную подвижную фазу для ВЭЖХ при необходимости перед употреблением дегазируют.

4.2.12 Крахмал (применяется по выбору пользователя), раствор массовой концентрацией 1 г/100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.2.13 Йод (применяется по выбору пользователя), раствор концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(IГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=0,05 моль/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.2.14 Кислота серная, раствор концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(HГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииSOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=0,1 моль/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.3 Стандартные вещества

4.3.1 Кислота аскорбиновая (L(+)-аскорбиновая) с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии99,0%

(R)-5-[(S)-1,2-дигидроксиэтил]-3,4-дигидрокси-5-Н-фуран-2-он.

4.3.2 Кислота изоаскорбиновая (D(-)-аскорбиновая) с массовой долей ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии(CГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииHГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии99,0%

(R)-5-[(R)-1,2-дигидроксиэтил]-3,4-дигидрокси-5-Н-фуран-2-он.

4.4 Основные стандартные растворы

4.4.1 Основной стандартный раствор аскорбиновой кислоты с массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииНГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=1 мг/смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

100 мг аскорбиновой кислоты (см. 4.3.1), измеренной с точностью до 0,1 мг, растворяют в определенном объеме (например, 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии) раствора метафосфорной кислоты (см. 4.2.8). Раствор готовят в день проведения анализа.

Стабильность основного раствора аскорбиновой кислоты может быть повышена добавлением L-цистеина.

4.4.2 Основной стандартный раствор изоаскорбиновой кислоты с массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииНГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=1 мг/смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

100 мг изоаскорбиновой кислоты (см. 4.3.2), измеренной с точностью до 0,1 мг, растворяют в определенном объеме (например, 100 мл) раствора метафосфорной кислоты (см. 4.2.8). Раствор готовят в день проведения анализа.

4.4.3 Проверка концентрации основного стандартного раствора (выполняется по выбору пользователя)

Около 150 мг аскорбиновой кислоты помещают в колбу Эрленмейера, добавляют 10 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора серной кислоты (см. 4.2.14) и 80 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии воды, не содержащей диоксида углерода, содержимое колбы перемешивают до полного растворения аскорбиновой кислоты. После добавления раствора крахмала (см. 4.2.12) полученный раствор титруют раствором йода (см. 4.2.13) до появления устойчивой синей окраски. Масса аскорбиновой кислоты, эквивалентная 1 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора йода, пошедшего на титрование, составляет 8,81 мг.

Массовую долю основного компонента в стандартном веществе ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии , %, вычисляют по формуле

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, (1)

где ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - объем раствора йода, пошедший на титрование, смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии;

8,81 - коэффициент пересчета;

100 - коэффициент пересчета результата в процентное содержание;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - масса навески стандартного вещества, мг.

4.5 Градуировочные растворы

4.5.1 Градуировочные растворы аскорбиновой кислоты массовыми концентрациями ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииНГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=5-50 мкг/смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

От 0,5 до 5,0 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии основного раствора аскорбиновой кислоты (см. 4.4.1) переносят пипеткой в мерные колбы вместимостью 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого в колбах доводят до метки раствором метафосфорной кислоты (см. 4.2.8). Растворы готовят в день проведения анализа.

4.5.2 Градуировочный раствор изоаскорбиновой кислоты с массовой концентрацией ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииНГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографииOГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии)=10 мкг/смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

1 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии основного раствора изоаскорбиновой кислоты (см. 4.4.2) переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, объем содержимого доводят до метки раствором метафосфорной кислоты (см. 4.2.8). Раствор готовят в день проведения анализа.

5 Приборы и оборудование

5.1 Общие положения

Для проведения испытаний используют лабораторные приборы, лабораторную посуду и оборудование из стекла, в частности перечисленные ниже.

5.2 Спектрофотометр с рабочим спектральным диапазоном в ультрафиолетовой области, пригодный для измерения оптической плотности при приведенных ниже длинах волн.

5.3 Жидкостный хроматограф

Система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства ввода пробы, спектрофотометрического детектора, пригодного для измерения оптической плотности при длине волны 265 нм, и системы сбора и обработки данных, например интегратора.

5.4 Колонка для ВЭЖХ-анализа

5.4.1 Общие положения

Критерием пригодности колонки является разделение пиков L-аскорбиновой и изоаскорбиновой кислот на уровне базовой линии [3].

5.4.2 Параметры хроматографической колонки

Колонка с внутренним диаметром 4,0 мм, длиной 250 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами и блокированными остаточными силанольными группами размером частиц сорбента 5 мкм.

Допустимо использовать колонку с другими размерами частиц сорбента или размерами колонки, чем те, что указаны в настоящем стандарте.

5.5 Устройство для фильтрации

Фильтрование подвижной фазы и раствора пробы перед использованием или вводом в хроматограф через мембранный фильтр размером пор, например 0,2 или 0,4 мкм, продлевает срок службы колонки.

6 Процедура проведения испытания

6.1 Общие положения

При проведении испытания обеспечивают предельно короткий промежуток времени между приготовлением растворов проб и градуировочных растворов и их анализом. Температура в помещении при проведении анализа не должна превышать 25 °С. Предельный срок использования анализируемых растворов - 8 ч с момента их приготовления.

6.2 Подготовка пробы

Исследуемую пробу гомогенизируют. Если проба представляет собой продукт твердой консистенции, ее измельчают на мельнице подходящей конструкции и снова тщательно перемешивают. Анализ пробы проводят непосредственно после ее гомогенизации. Подготовку к анализу проб свежих фруктов и овощей проводят одновременно с экстракцией (см. 6.3.1).

6.3 Приготовление раствора пробы для анализа

6.3.1 Экстракция

Навеску пробы массой, например, 3 г (при содержании витамина С в пробе около 50 мг/100 г), измеренной с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, добавляют 80 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора метафосфорной кислоты (см. 4.2.8), тщательно перемешивают, после чего объем в колбе доводят до метки. Содержимое колбы снова перемешивают, после чего фильтруют. Полученный раствор представляет собой экстракт из пробы.

При анализе свежих фруктов и овощей от 2 до 10 г измельченной ножом пробы помещают в стакан вместимостью 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, затем вносят некоторое количество раствора метафосфорной кислоты (см. 4.2.8). Содержимое стакана гомогенизируют, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, перемешивают и фильтруют. Полученный раствор представляет собой экстракт из пробы.

Примечание - Стабильность аскорбиновой кислоты в растворе можно повысить, например, путем добавления к раствору метафосфорной кислоты 125 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора L-цистеина (см. 4.2.10), дитиотрейтола или диэтилтиаминфосфорной кислоты. При этом следует иметь в виду, что эти стабилизаторы могут влиять на качество хроматографического разделения. Данная процедура не была использована при проведении межлабораторных испытаний.

6.3.2 Проведение реакции восстановления

Аликвоту отфильтрованного экстракта (см. 6.3.1) объемом 20 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии переносят в стакан вместимостью 50 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, добавляют 10 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора L(+)-цистеина. Значение рН полученного раствора доводят до 7,0-7,2 при измерении с помощью рН-метра путем добавления по каплям раствора тринатрийфосфата (см. 4.2.9) при постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки. По достижении указанного значения рН раствор выдерживают точно 5 мин при постоянном перемешивании. По истечении указанного времени значение рН раствора доводят до 2,5-2,8 (по рН-метру) путем добавления по каплям раствора метафосфорной кислоты (см. 4.2.7) при постоянном перемешивании. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, при этом электроды рН-метра, рабочий элемент магнитной мешалки и стакан, в котором находился раствор, ополаскивают водой, перенося смывы в ту же колбу. Объем содержимого в мерной колбе доводят до метки водой, содержимое колбы перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр (см. 5.5), фильтрат используют для хроматографического анализа.

При наличии информации о присутствии в анализируемом продукте добавок-загустителей рекомендуется их удалить из анализируемого раствора перед его хроматографическим анализом во избежание порчи хроматографической колонки. Для этого к порции восстановленного раствора пробы объемом 4 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии добавляют 1 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии метанола (см. 4.2.6), полученный раствор перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр (см. 5.5). Фильтрат используют для хроматографического анализа.

6.4 Идентификация

Пик L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме раствора пробы идентифицируют по совпадению его времени удерживания со временем удерживания пика аналита на хроматограмме градуировочного раствора, полученной при тех же параметрах хроматографического анализа. Идентификацию пика аналита можно также проводить путем добавления стандартного раствора в раствор пробы.

Ниже приведены параметры хроматографического анализа, обеспечивающие требуемую степень хроматографического разделения и пригодные для количественного определения (см. также рисунок А.1). Данные параметры были использованы при проведении межлабораторных испытаний.

Параметры хроматографической колонки: колонка, заполненная обращенно-фазовым сорбентом на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами и блокированными остаточными силанольными группами размером частиц сорбента 5 мкм, длина колонки 250 мм, внутренний диаметр 4,0 мм;

подвижная фаза

смесь раствора А и раствора В (4.2.11);

скорость потока подвижной фазы

0,7 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии/мин;

ижектируемый объем

30 ммГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии;

длина волны детектирования

265 нм.


Данные параметры хроматографического анализа позволяют также идентифицировать пик изоаскорбиновой кислоты, не являющейся витамином С.

Примечание - В качестве других приемлемых параметров хроматографического анализа можно использовать подвижную фазу, состоящую из 10% ацетонитрила и 90% смешанного водного раствора однозамещенного фосфата калия массовой концентрацией 13,6 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и цетримида концентрацией 2 г/дмГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с колонкой, заполненной обращенно-фазовым сорбентом с привитыми октильными группами (СГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии) размером частиц 10 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, при скорости потока (1,0±0,1) смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии/мин.

6.5 Количественное определение

Проводят хроматографический анализ раствора пробы и градуировочного раствора при одинаковых объемах инжекции (до 50 ммГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии). Обработку результатов проводят по методу внешнего стандарта либо с использованием градуировочной характеристики.

При использовании метода внешнего стандарта массовую концентрацию анализируемого вещества в растворе пробы рассчитывают, исходя из площади или высоты пика аналита на хроматограмме раствора пробы и соотношения между массовой концентрацией аналита в градуировочном растворе и площадью или высотой пика на хроматограмме этого раствора.

При использовании градуировочной характеристики контролируют соблюдение условия нахождения ее области определения в границах линейной зависимости аналитического сигнала от массовой концентрации аналита.

7 Обработка результатов

Расчет результата анализа проводят с использованием градуировочной характеристики или с помощью соответствующей программы интегратора, либо применяют следующий упрощенный способ.

Массовую долю аскорбиновой кислоты ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/100 г, вычисляют по формуле

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, (2)

где ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме раствора пробы (см. 6.3.2), в единицах площади или высоты;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - массовая концентрация L-аскорбиновой кислоты в градуировочном растворе, мкг/смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - общий объем приготовленного по 6.3.1 раствора пробы перед проведением реакции восстановления, смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - коэффициент разбавления, применяемого при проведении реакции восстановления (в данном случае ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии2,5);

100 - коэффициент пересчета результата в мг на 100 г;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме градуировочного раствора (см. 4.5.1), в единицах площади или высоты;

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - масса навески пробы, г;

1000 - коэффициент пересчета из микрограммов в миллиграммы.

Результат выражают в мг/100 г.

В случае, если процедура анализа включала в себя операцию осаждения загустителей по 6.3.2, результат, полученный по формуле (2), умножают на 5/4.

8 Прецизионность

8.1 Общие положения

Значения характеристик прецизионности при определении витамина С были получены в 1997 г. в результате межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с ИСО 5725 [2], [4]. Для других областей содержания аналита и типов матриц значения характеристик прецизионности методики могут отличаться от значений, приведенных в приложении В.

8.2 Повторяемость

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования в течение короткого промежутка времени, должно превышать предел повторяемости ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии не более чем в 5% случаев.

Значения предела повторяемости равны:

апельсиновый сок: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии54,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии6,4 мг/100 г;

овощной консервированный суп: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии35,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии3,7 мг/100 г;

сухое молоко (порошок): ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии100,3 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии17,9 мг/100 г;

суп-концентрат сублимационной сушки: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии169,3 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии42,0 мг/100 г;

сухой завтрак (концентрат): ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии102,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии28,7 мг/100 г;

фруктовые консервы для детского питания: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии47,1 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии7,1 мг/100 г.

8.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, должно превышать предел воспроизводимости ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии не более чем в 5% случаев.

Значения предела воспроизводимости равны:

апельсиновый сок: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии54,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии30,3 мг/100 г;

овощной консервированный суп: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии35,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии21,7 мг/100 г;

сухое молоко (порошок): ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии100,3 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии32,2 мг/100 г;

суп-концентрат сублимационной сушки: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии169,3 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии74,3 мг/100 г;

сухой завтрак (концентрат): ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии102,6 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии56,2 мг/100 г;

фруктовые консервы для детского питания: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии47,1 мг/100 г, ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии23,9 мг/100 г.

9 Протокол результатов испытаний

Протокол результатов испытаний должен содержать, как минимум, следующие сведения:

- всю информацию, необходимую для идентификации пробы;

- ссылку на настоящий стандарт или использованный метод;

- дату и время отбора пробы (если известны);

- дату поступления пробы в лабораторию;

- дату проведения испытания;

- результаты испытания с указанием единиц измерения;

- все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;

- все операции, не оговоренные в методике или считающиеся необязательными, которые могли повлиять на результат испытания.

Приложение А (справочное). Пример хроматограммы

Приложение А
(справочное)

Рисунок А.1 - Пример хроматограммы при анализе аскорбиновой кислоты в апельсиновом соке с помощью ВЭЖХ

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии


Рисунок А.1 - Пример хроматограммы при анализе аскорбиновой кислоты в апельсиновом соке с помощью ВЭЖХ

Условия хроматографического анализа:

колонка, заполненная сорбентом Lichrospher 100 RP 18 с блокированными остаточными силанольными группами размером частиц сорбента 5 мкм, внутренний диаметр колонки 4,0 мм, длина 250 мм;

подвижная фаза - смесь раствора А и раствора В (см.4.2.11);

скорость потока - 0,7 смГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии/мин;

инжектируемый объем - 30 ммГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии;

длина волны детектирования - 265 нм;

время удерживания аскорбиновой кислоты - ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии11,953 мин.

Приложение В (справочное). Данные по прецизионности методики

Приложение В
(справочное)

Приведенные ниже данные получены в результате межлабораторных испытаний [2], [4]. Процедура проведения испытания не включала в себя операцию восстановления L-дегидроаскорбиновой кислоты.

Примечание - После проведения данных межлабораторных испытаний ИСО 5725:1986 был заменен на ИСО 5725-1, ИСО 5725-2, ИСО 5725-3, ИСО 5725-4 и ИСО 5725-6 (все издания 1994 г.), а также ИСО 5725-5:1998.


Таблица В.1 - Данные по прецизионности определения общего содержания витамина С

Образец

1

2

3

4

5

6

Год проведения испытаний

1997

1997

1997

1997

1997

1997

Число лабораторий-участников

15

15

15

15

15

15

Число лабораторий, за исключением выбросов

14

15

14

14

14

14

Число принятых результатов

28

30

28

28

28

28

Среднее значение ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/100 г

54,6

35,6

100,3

169,3

102,6

47,1

Стандартное отклонение повторяемости ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/100 г

2,3

1,3

6,3

14,8

10,2

2,5

Относительное стандартное отклонение повторяемости, %

4,2

3,6

6,3

8,8

9,9

5,3

Предел повторяемости (ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии), мг/100 г

6,4

3,7

17,9

42,0

28,7

7,1

Стандартное отклонение воспроизводимости ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, мг/100 г

10,7

7,7

11,4

26,2

19,8

8,5

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости, %

19,7

21,6

11,4

15,5

9,3

18,0

Предел воспроизводимости (ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии), мг/100 г

30,3

21,7

32,2

74,3

56,2

23,9

1 - апельсиновый сок; 2 - овощной консервированный суп; 3 - сухое молоко; 4 - суп-концентрат сублимационной сушки; 5 - сухой завтрак (концентрат); 6 - фруктовые консервы для детского питания.

Приложение ДА (справочное). Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов ссылочным национальным стандартам Российской Федерации



Приложение ДА
(справочное)

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта

ЕН ИСО 3696

MOD

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия"

Примечание - В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:

- MOD - модификационный стандарт

Библиография

[1] Dennison D.B., Brawley T.G., Hunter G.L.K., (1981), J. Agric. Food Chem., 29, 925-927

[2] Arella F., Deborde J.L., Bourguignon J.B., Hasselmann C. (1997) Ann. Fals. Exp. Chim., 90, No 940, 217-233

[3] Coustard J.M., Sudraud G., (1981), Journal of Chromatogtaphy, 219, 338-3-42

[4] ISO 5725:1986, Precision of test methods. Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests


Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2012

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Название документа: ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Номер документа: ЕН 14130-2010

Вид документа: ГОСТ Р

Принявший орган: Росстандарт

Опубликован: официальное издание

М.: Стандартинформ, 2012 год

Дата принятия: 26 ноября 2010

Дата начала действия: 01 января 2012
Дата окончания действия: 01 января 2019
ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или