• Текст документа
  • Статус
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


МУК 4.2.2578-10


МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса



Дата введения: с момента утверждения


1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (И.В.Брагина); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (А.И.Верещагин, М.В.Зароченцев, И.В.Новокшонова, М.А.Ярославцева); ФГУН ГНЦ МПБ Роспотребнадзора (М.В.Храмов, В.М.Храмов); ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.Я.Салова); фирмой "SY-LAB Gerate GmbH", Австрия (М.Шинкингер, Е.Я.Слободецкая, М.Б.Беглов).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 03.12.09 N 3).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 19.02.10.

4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН МУК 4.2.590-96 "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "БакТрак 4100" и методических указаний "Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-бактериологического исследования объектов окружающей среды", 2005 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также мониторинг их микробной загрязненности; лабораторий других организаций, аккредитованных в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья и пищевых продуктов; организаций, независимо от форм собственности осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и оборота продукции.

1.2. Методические указания представляют ускоренный метод качественного и количественного определения санитарно-показательных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, регламентированных действующими документами (технические регламенты, СанПиН, ГОСТ, МУК, МУ и т.д.).

2. Нормативные ссылки

1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

2. Федеральный закон "О качестве и безопасности пищевых продуктов" от 02 января 2000 г. N 29-ФЗ.

3. СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

4. СанПиН 2.3.2.1280-03 "Дополнения и изменения 2 к СаН-ПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

5. ГОСТ 51446-99* (ИСО 7218-96) "Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".
______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 7218-2008. - Примечание изготовителя базы данных.

6. ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа".

7. СанПиН 1.2.681-97 "Производство и контроль парфюмерно-косметической продукции для обеспечения ее безопасности и качества".

3. Сущность импедансного метода


Методические указания содержат описание метода ускоренного микробиологического исследования продовольственного сырья, пищевых продуктов и других объектов внешней среды с использованием микробиологических экспресс-анализаторов, регистрирующих изменения электрического сопротивления (импеданса) питательной среды, происходящего под влиянием процессов роста и жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемой пробе.

Классические методы микробиологических исследований, используемые в практике бактериологических лабораторий, требуют больших затрат труда и времени, достаточно длительны и позволяют получать результаты в течение нескольких дней.

Предлагаемый метод на основе метода разделенного импеданса позволяет получать быстрые (в течение нескольких часов) и надежные результаты для большого числа одновременно исследуемых образцов.

Импеданс - сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал; является функцией активной проводимости, емкостного сопротивления и применяемой частоты.

Приборы "БакТрак" серии 4000 на основе метода разделенного импеданса регистрируют 2 определенных показателя импеданса для каждого измерения. Эти величины показаны как М-величина (импеданс среды) и Е-величина (импеданс электрода). Измерения М-параметра представляет собой относительное изменение (уменьшение) импеданса среды, выраженное в процентах к начальному измерению. М-параметр в основном отображает ту часть импеданса, которая связана с активной проводимостью. На него непосредственное влияние оказывает ионный состав среды при росте микроорганизмов, а также используемый для анализа образец. В силу этих причин при высокой электропроводимости питательной среды данный параметр теряет значимость. На величину Е-параметра состав питательной среды влияет уже не в столь сильной мере, что весьма важно в случаях, когда используются среды с высоким содержанием солей (т.е. в них добавлены соли в качестве селективных компонентов, используемых для обнаружения патогенных микроорганизмов).

Импедансная микробиология является непрямым культуральным методом обнаружения микроорганизмов с использованием определения электрического импеданса. Изменения импеданса обычно происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав изменяется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду. В основном незаряженные или слабо заряженные субстраты превращаются в сильно заряженные конечные продукты. Так, например, белки метаболизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические изменения в ростовой среде приводят к существенным изменениям импеданса. Экспоненциальные изменения импедансного сигнала могут наблюдаться, когда количество микроорганизмов достигает порога около 10МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса-10МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса клеток/мл.

Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе.

Среди разработанных и применяющихся в настоящее время исследовательских микробиологических экспресс-анализаторов, предназначенных для ускоренного обнаружения микроорганизмов на основе импедансных технологий, наибольшее распространение получили приборы серии "Бак Трак 4000" производства фирмы "SY-LAB Gerate GmbH" (Австрия).

Прибор "БакТрак" является автоматизированной экспресс-системой для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробной контаминации продовольственного сырья, пищевых продуктов, косметической и фармацевтической продукции, питьевой воды и других объектов внешней среды.

Приборы "БакТрак 4300", "БакТрак 4100" и "БиоТрак 4250" внесены в Реестр средств измерений как кондуктометрические анализаторы для микробиологических исследований. Метод, основанный на измерении импеданса, приборы "БакТрак 4300", "БакТрак 4100" и "БиоТрак 4250", внесены в Национальные стандарты ряда европейских стран: Германии - DIN 10115*, 10120*, 10121*, Австрии - ONORM 10115*, 10120*, 10121*, Франции - AFNOR NF V08-105* (Микробиология продуктов питания и кормов: указания по импедансному методу для микробиологических исследований), AFNOR NF V08-106* (Определение количества МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса в морепродуктах качественным методом, используя метод прямого импеданса).
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


Метод валидирован как альтернативный метод анализа в соответствии с ISO 16140:2003 Институтом стандартизации AFNOR, Франция.

4. Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

4.1. Экспресс-анализатор "БакТрак 4300"


Экспресс-анализатор "БакТрак 4300" включает:

- 2 инкубаторных блока для одновременного анализа 64 образцов, каждый инкубаторный блок имеет независимую систему термостатирования;

- управляющий блок (персональный компьютер);

- программное обеспечение; программа позволяет подключать до 12 модулей "БакТрак 4300", обычная конфигурация: 1-3 "БакТрака" подключаются к управляющему блоку;

- измерительные ячейки:

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса многоразовые измерительные ячейки (стеклянные) на 10 мл с 4 электродами (с зелеными, желтыми и красными крышками);

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса многоразовые измерительные ячейки (стеклянные) на 10 мл с 4 электродами для анаэробов;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса одноразовые измерительные ячейки (пластиковые), стерильные на 20 мл;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса измерительные ячейки для определения дрожжей и плесеней с ограниченным сроком использования на 20 мл (для непрямого метода);

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса одноразовые пластиковые стерильные внутренние пробирки для измерительных ячеек непрямого метода на 7 мл.

4.2. Экспресс-анализатор "БакТрак 4100"


Экспресс-анализатор "БакТрак 4100" включает:

- 1 инкубаторный блок, представляющий собой алюминиевую камеру на 40 образцов;

- управляющий блок (персональный компьютер);

- программное обеспечение. Можно одновременно использовать до 6 блоков, подключенных к одному персональному компьютеру;

- измерительные ячейки (те же самые, что и для "БакТрака 4300").

4.3. Экспресс-анализатор "БиоТрак 4250"


Экспресс-анализатор "БиоТрак 4250" включает:

- 1 инкубаторный блок с возможностью одновременного анализа до 21 образца;

- управляющий блок (портативный компьютер);

- программное обеспечение;

- измерительные ячейки (те же самые, что и для "БакТрака 4300" за исключением измерительных ячеек для анаэробов).

Дополнительно для всех приборов имеются:

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса температурные ячейки NTC 1000 Ом, 10 мл;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса набор для охлаждения прибора;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса набор для очистки прибора;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса набор измерительных ячеек для проверки прибора;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса ультразвуковая мойка для ячеек (рекомендуется);

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса источник бесперебойного питания;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса набор сухих питательных сред (гл.9).

Для работы с анализаторами серии "БакТрак 4000" в лаборатории должны быть в наличии:

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса стерилизатор паровой;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса шкаф сушильно-стерилизационный;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса шкаф ламинарный (бокс биологической безопасности);

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса термостаты;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса весы лабораторные;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса рН-метр;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса посуда лабораторная;

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса пипетки и дозаторы.

5. Установка параметров измерения при работе на приборах серии "БакТрак 4000"

5.1. Установка параметров измерения при работе на приборе "БакТрак 4100"

1. Установить температуру измерения на инкубаторном блоке прибора "БакТрак 4100".

2. В основном меню программы выбрать подменю "Параметры блока" и установить следующие параметры:

Время исследования

Интервал

10 мин (20 мин)

Время нагрева

1 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

Е-параметр


3. В основном меню программы выбрать подменю "Параметры ячейки" и ввести следующие параметры:

Текст

Вид продукции или определяемого показателя

Установить

В случае использования калибровочного файла для проведения анализа выбрать соответствующий файл в данной директории "Параметры", тогда пороговые значения и временные интервалы вводятся автоматически

Пороговые значения

Установить параметры для учета результатов - "Порог М" и/или "Порог Е", ввести пороговые значения для М-параметра и Е-параметра

Временные интервалы

Ввести пороговые значения по времени - "Интервал 1" и "Интервал 2"



Сохранить введенные параметры измерения.

Созданный список исследований использовать в дальнейшем для задания параметров измерений.

4. Выбрать в основном меню программы подменю "Начать измерение".

5. После того как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, установить для каждой позиции параметры измерения (с помощью клавиши F3 вызвать весь список исследований и выбрать соответствующий для данного типа анализа) и поместить измерительные ячейки в инкубаторный блок.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

6. При пересечении заданных пороговых значений для М-параметра или Е-параметра проба оценивается по светофорной системе - красному, желтому, зеленому цветам (в случае если были заданы временные интервалы) и/или происходит автоматический подсчет микроорганизмов в исследуемом образце (в случае использования калибровочного файла).

Посредством клавиш F5, F6, F7 и F8 можно изменить тип индикации и получить полную информацию на каждое измерительное место.

Подробное описание программы и порядок действий при работе на приборе представлены в инструкции для пользователя.

5.2. Установка параметров измерения при работе на приборе "БакТрак 4300"


Программное обеспечение для работы на микробиологическом анализаторе "БакТрак 4300" состоит из двух частей:

"БакМонитор" - программа, осуществляющая управление данными, контроль за ходом измерения и получения результатов анализа.

"БакЭвал" - программа для дальнейшей работы с результатами измерения.

1. В основном меню программы "БакМонитор" выбрать меню "Установка/Установка температуры и интервала" и установить следующие параметры измерения:

Температура измерения

Интервал

10 мин (20 мин)


2. В основном меню программы "БакМонитор" выбрать меню "Настройка/Данные о пользователе" и ввести информацию.

3. В основном меню программы "БакМонитор" выбрать меню "Вид/Установка параметров измерения". Для создания и сохранения параметров измерения выбрать меню "Анализ/Создать новый" и ввести следующие параметры измерения:

Название

Вид продукции или определяемого показателя

Комментарий

Температура

Время нагрева

1 ч

Время исследования

Тип оценки

Установить параметры для учета результатов - "Порог М" и/или "Порог Е"

Пороговые значения

Ввести пороговые значения для М-параметра и Е-параметра

Временные интервалы

Ввести пороговые значения по времени - "Интервал 1" и "Интервал 2"

Калибровочный файл

В случае использования калибровочного файла при проведении анализа ввести название соответствующего файла



Сохранить введенные параметры измерения. Созданный список исследований использовать в дальнейшем для задания параметров измерений.

4. Выбрать в основном меню программы подменю "Начало измерений".

5. После того как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, установить для каждой позиции параметры измерения (нажав на F6 или выбрав окно "Установка параметров измерения", выбрать соответствующий анализ из списка исследований, имя пользователя) и поместить измерительные ячейки в инкубаторный блок. Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

6. При пересечении заданных пороговых значений для М-параметра или Е-параметра проба оценивается по светофорной системе - красному, желтому, зеленому цветам (в случае если были заданы временные интервалы) и/или происходит автоматический подсчет микроорганизмов в исследуемом образце (в случае использования калибровочного файла).

Посредством клавиш F5, F6 и F7 можно изменить тип индикации и получить полную информацию на каждое измерительное место.

Подробное описание программы и порядок действий при работе на приборе представлены в инструкции для пользователя.

5.3. Установка параметров измерения при работе на приборе "БиоТрак 4250"

1. Программное обеспечение для работы на микробиологическом анализаторе "БиоТрак 4250" состоит из двух частей:

"МикроТрак" - программа, осуществляющая управление данными, контроль за ходом измерения и получения результатов анализа.

"МикроАссист" - программа для дальнейшей работы с результатами измерения.

2. В основном меню программы "МикроТрак" установить температуру измерения.

3. В основном меню программы "МикроТрак" выбрать меню "Настройка/Интервал измерений" и установить интервал измерений:

Интервал

10 мин (20 мин)


4. В основном меню программы МикроТрак выбрать меню "Настройка/Данные о пользователе" и ввести информацию о пользователе.

5. В основном меню программы МикроТрак выбрать меню "Вид/Установка параметров измерения". Для создания и сохранения параметров измерения выбрать меню "Анализ/Создать новый" и ввести следующие параметры измерения:

Название

Вид продукции или определяемого показателя

Комментарий

Температура

Время нагрева

1 ч

Время исследования

Тип оценки

Установить параметры для учета результатов - "Порог М"

Пороговые значения

Ввести пороговые значения для М-параметра

Временные интервалы

Ввести пороговые значения по времени - "Интервал 1" и "Интервал 2"

Калибровочный файл

В случае использования калибровочного файла при проведении анализа ввести название соответствующего файла



Сохранить введенные параметры измерения.

Созданный список исследований использовать в дальнейшем для задания параметров измерений.

6. После того как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, установить для каждой позиции параметры измерения (нажав на F6 или выбрав окно "Установка параметров измерения", выбрать соответствующий анализ из списка исследований, имя пользователя) и поместить измерительные ячейки в инкубаторный блок.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

7. При пересечении заданных пороговых значений для М-параметра происходит автоматический подсчет микроорганизмов в исследуемом образце (в случае использования калибровочного файла).

Посредством клавиш F5, F6 и F7 можно изменить тип индикации и получить полную информацию на каждое измерительное место.

Подробное описание программы и порядок действий при работе на приборе представлены в инструкции для пользователя.

6. Методики определения санитарно-показательных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов

6.1. Определение мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)

1. Среда:

BiMedia 001В (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 30 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-50%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

10%



Учет результатов проводится по М-параметру.

При наличии калибровочного файла для исследуемого вида продукции параметры пороговых значений вносятся автоматически.

4. Внести в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды.

5. Внести 1 мл предварительно подготовленного образца в соответствии с требованиями нормативной документации в измерительную ячейку с 9 мл среды (жидкие образцы могут быть внесены без разведений).

6. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля питательной среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерение.

9. После того как каждая позиция инкубаторного блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце (при наличии калибровочного файла).

Учет результатов.

Результат определения КOE выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца.

Если исследуется твердый продукт, то результат определения КOE необходимо умножить на степень разведения (МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса10) для получения значения КOE в 1 г исследуемого образца.

Примечание.

При исследовании образцов, содержащих консерванты, в питательную среду следует добавить Supplement I или инактивационную смесь следующего состава (г/л):

Твин-80 - 30,0 г;

лецитин - 3,0 г;

L-гистидин HCI - 1,0 г;

NaМУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импедансаSМУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импедансаOМУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса·5HМУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импедансаO - 5,0 г;

пептон - 1,0 г (соотношение "образец : раствор" - 1:10).


Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в гл.6 данных методических указаний.

6.2. Определение колиформных бактерий

1. Среда:

BiMedia 160С (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 37 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-50%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

10%

Временные интервалы:

Интервал 1

12 ч

Интервал 2

18 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 160С.

5. Внести исследуемый образец из соответствующего разведения, в котором не допускается наличие колиформных бактерий, в объеме 1 мл.

6. При определении колиформных бактерий в 1 г продукта приготовить суспензию из 20 г продукта и 80 мл физраствора или пептонной воды. Внести в ячейку 5 мл среды 160С двойной концентрации и 5 мл ранее приготовленной суспензии анализируемого продукта.

7. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

8. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

9. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерения.

10. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в инкубаторный блок прибора.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Исследуемое количество пробы содержит единичные клетки колиформных бактерий и проба считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 5%-е пороговое значение по М-параметру и 10%-е - по Е-параметру в течение 12 ч.

При положительном результате наблюдается изменение исходного пурпурного цвета среды на желтый, а также ее помутнение.

Примечание.

Если клетки колиформных бактерий находились в стрессовом состоянии (термическая обработка, замораживание, высушивание, влияние ингибиторов и т.д.), то может наблюдаться более медленный рост культуры с увеличением времени определения по М-параметру до 18 ч.


Если изменение импеданса превышает 5%-е пороговое значение по М-параметру и 10%-е - по Е-параметру в течение 18 ч, проба считается контаминированной.

При анализе кисло-молочных продуктов необходимо провести урегулирование рН, т.к. возможно получение ложноположительных результатов при низком значении рН.

При необходимости определения E. coli в пробах, давших положительный результат, ставятся тесты с бета-глюкоронидазой и/или индольный тест непосредственно в измерительной ячейке, также возможен высев на чашки Петри со средой Эндо.

6.3. Определение колиформных бактерий в воде

1. Среда:

BiMedia 165А (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 32 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-30%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

3%

Е-параметр

10%

Временной интервал:

Интервал 1

18 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 165А.

5. Внести исследуемый образец в объеме 1 мл.

6. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерения.

9. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в инкубаторный блок прибора.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Исследуемое количество пробы содержит единичные клетки колиформных бактерий и проба считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 3%-е пороговое значение по М-параметру и 10%-е - по Е-параметру в течение 18 ч.

При положительном результате наблюдается изменение исходного пурпурного цвета среды на желтый, а также ее помутнение.

Примечание.

При анализе фекальных колиформных бактерий в воде необходимо увеличить температуру до 44 °С.


При необходимости определения E. coli в пробах, давших положительный результат, ставятся тесты с бета-глюкоронидазой и/или индольный тест непосредственно в измерительной ячейке, также возможен высев на чашки Петри со средой Эндо.

6.4. Определение E.coli

1. Среда:

BiMedia 150В (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 40 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

12 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-20%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

15%

Временной интервал:

Интервал 1

12 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 150В.

5. Внести исследуемый образец из соответствующего разведения, в котором не допускается наличие E. coli , в объеме 1 мл.

6. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерения.

После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить ячейки в прибор.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Исследуемое количество пробы содержит клетки E. coli и проба считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 5%-е пороговое значение по М-параметру и 15%-е - по Е-параметру в течение 12 ч.

6.5. Определение энтеробактерий

1. Среда:

BiMedia 140А (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 37 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

12 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-30%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

не учитывается

Временной интервал:

Интервал 1

12 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 140А.

5. Внести исследуемый образец из соответствующего разведения, в котором не допускается наличие Энтеробактерий, в объеме 1 мл.

6. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерения.

9. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить ячейки в измерительный блок прибора.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Исследуемое количество пробы содержит клетки энтеробактерий и проба считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 5%-е пороговое значение по М-параметру в течение 12 ч.

6.6. Определение Pseudomonas

1. Среда:

BiMedia 130А (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 30 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

48 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-30%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева:

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

не учитывается

Временной интервал:

Интервал 1

40 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 130А.

Внести исследуемый образец из соответствующего разведения, в котором не допускается наличие Pseudomonas в объеме 1 мл.

5. Тщательно перемешать содержимое ячейки, вращая ее между ладонями (не переворачивать ячейку!).

Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл питательной среды (без инокулята).

6. Выбрать в основном меню программы "Начало измерений" и начать измерения.

После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить ячейки в измерительный блок прибора.

7. Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Исследуемое количество пробы содержит клетки Pseudomonas и проба считается контаминированной, если изменение импеданса превышает 5%-е пороговое значение по М-параметру в течение 40 ч.

6.7. Определение сальмонелл

1. Среды:

BiMedia 201С (модифицированная среда Раппапорта-Вассилиадиса).

BiMedia 205 А (модифицированная селенитовая среда).

Среды готовятся в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя. В соответствии с ГОСТ 52814-2007 и ИСО 6579:2002 для определения Salmonella необходимо параллельно использовать две среды BiMedia 201С и BiMedia 205С.

2. Стадия предобогащения.

Гомогенизировать необходимое количество исследуемой пробы (в которой НТД регламентируется отсутствие сальмонелл) и развести стерильной 1% пептонной водой в соотношении 1:10.

Тщательно перемешать. Инкубировать в течение 16-18 ч при температуре 37 °С. Период предварительной инкубации для мясных, рыбных и молочных продуктов составляет 6-8 ч при 37 °С.

6.7.1. Определение сальмонелл на среде BiMedia 201С

1. Установить температуру 41,5 °С на приборе "БакТрак".

2. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 2-10%

Е-параметр

- 5-80%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

3%

Е-параметр

10%

Временной интервал:

Интервал 1

23 ч



Проводить учет результатов по Е-параметру.

3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 201С.

4. Внести по 0,1 мл предобогащенного образца в каждую измерительную ячейку; тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).

5. Выбрать в основном меню программы прибора "Начало измерений" и начать измерение.

6. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в измерительный блок прибора.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Образец контаминирован сальмонеллами, если измерение импеданса по Е-параметру превышает 10%-е пороговое значение в течение 23 ч.

Подтверждение Salmonella -позитивных образцов.

В случае положительного результата на присутствие сальмонелл проводится подтверждение высевом на чашки Петри с селективными питательными средами в соответствии с требованиями нормативно-технической документации. Высев производится непосредственно из измерительной ячейки.

Примечание.

При исследовании мясных продуктов продолжительность измерения может быть сокращена до 21 ч 30 мин.


Возможно использование уже заполненных средой 201С одноразовых ячеек.

Рекомендуется использовать ячейки с зелеными крышками.

6.7.2. Определение сальмонелл на среде BiMedia 205А

1. Установить температуру 37 °С на приборе "БакТрак".

2. В основном меню программы прибора установить следующие параметры инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-30%

Е-параметр

- 5-40%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

10%

Е-параметр

не учитывается

Временной интервал:

Интервал 1

23 ч



Проводить учет результатов по М-параметру.

3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 205А.

4. Внести по 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку; тщательно перемешать содержимое, вращая измерительную ячейку между ладонями (не переворачивая ячейку!).

5. Выбрать в основном меню программы прибора "Начало измерений" и начать измерение.

6. После того как каждая позиция в инкубаторном блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в блок прибора.

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор.

Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

Учет результатов.

Образец контаминирован сальмонеллами, если измерение импеданса превышает 10%-е пороговое значение по М-параметру в течение 23 ч.

Подтверждение Salmonella -позитивных образцов.

В случае положительного результата на присутствие сальмонелл проводится подтверждение с высевом на чашки Петри с селективными питательными средами в соответствии с требованиями нормативно-технической документации. Высев производится непосредственно из измерительной ячейки.

6.8. Определение энтерококков

1. Среда:

BiMedia 330А (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя).

2. Установить температуру 37 °С на приборе "БакТрак".

3. В основном меню программы прибора установить следующие параметры для инкубаторного блока:

Время исследования

24 ч

Масштаб измерений:

М-параметр

- 5-30%

Е-параметр

- 5-50%

Время нагрева

1 ч

Пороговые значения:

М-параметр

5%

Е-параметр

не учитывается

Временной интервал:

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса

Название документа: МУК 4.2.2578-10 Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса

Номер документа: 4.2.2578-10

Вид документа: МУК (Методические указания по методам контроля)

Принявший орган: Главный государственный санитарный врач РФ

Статус: Действующий

Опубликован: официальное издание

М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010 год

Дата принятия: 19 февраля 2010

Дата начала действия: 19 февраля 2010