ГОСТ 32012-2012 Молоко и молочная продукция. Методы определения содержания спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (Издание с Поправкой)

     6 Метод определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

6.1 Сущность метода

Метод основан на способности спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (бактерий), сохранившихся после тепловой обработки исследуемого материала или его разведений при температуре (75±1)°С в течение 30 мин, прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в питательных средах.

Метод предназначен для оценки сырого молока и выявления источника микробиологической порчи молочных продуктов.

6.2 Подготовка к анализу

6.2.1 Приготовление раствора хлористого натрия (физиологический раствор) для приготовления разведений

В 1 дм питьевой воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, затем раствор разливают по 10 см в чистые стеклянные пробирки диаметром 21 мм, по 93 см - в колбы. Емкости закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (20±5) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться около 9 см, а в колбах - около 90 см раствора хлористого натрия.

6.2.2 Приготовление рабочей питательной среды СДА для определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

6.2.2.1 (50±5) г сухой среды СДА вносят в 1 дм воды, тщательно перемешивают, нагревают и кипятят 3-5 мин, не допуская пригорания. В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20%-ным раствором гидроокиси натрия или 20%-ным раствором молочной или соляной кислоты до значения (7,3±0,1) рН. Готовую среду разливают в пробирки по (12±1) см, закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

Готовая рабочая питательная среда должна иметь интенсивно красный цвет.

Готовую рабочую питательную среду хранят в холодильнике при температуре (8±2)°С не более 1 мес или при температуре от 18°С до 23°С не более 7 сут при условии сохранения внешнего вида среды.

6.2.2.2 Допускается приготовление рабочей питательной среды для определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий из отдельных ингредиентов. Для этого в 1 дм питьевой воды вносят 33,3 г гидролизата белков молока, 15,0 г микробиологического агара, 0,5 г солянокислого цистеина или 1,0 г аскорбиновой кислоты, 1,0 г растворимого крахмала и 5,0 г уксуснокислого натрия. Растворяют добавленные компоненты, нагревая смесь в текучем паре. Добавляют 5,0 г глюкозы и 4,0 г сухого дрожжевого автолизата. Устанавливают рН (7,1±0,1), разливают среду в пробирки по (10±2) см, закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

При длительном хранении рабочей питательной среды (более 20 сут) после охлаждения пробирок со средой в стерильных условиях ватные пробки заменяют на стерильные резиновые пробки.

Рабочую питательную среду хранят в холодильнике при температуре (8±2) °С не более 1 мес или при температуре от 18°С до 23°С не более 7 сут при условии сохранения внешнего вида среды.

6.2.3 Приготовление водного агара

В 1 дм питьевой воды вносят 15 г агара и нагревают до кипения. После расплавления агара раствор в горячем состоянии разливают в пробирки по 15 см или в колбы по 50-100 см, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

6.3 Подготовка образцов к анализу

6.3.1 Подготовка образцов сырого молока и жидкой молочной продукции

Пробы жидкой молочной продукции (сырое молоко, восстановленное молоко и другие, аналогичные по консистенции продукты) тщательно перемешивают и отбирают для анализа стерильной пипеткой по 15 см, переносят в стерильные пробирки, которые закрывают стерильными ватными пробками. При этом необходимо следить, чтобы капельки продукта не попадали на стенки пробирок.

Подготовленные пробирки вместе с контрольной пробиркой, в которой находится 10 см раствора хлористого натрия по 6.2.1 или воды и термометр, помещают в водяную баню. Уровень воды в водяной бане должен быть выше уровня продукта на 10-15 мм. Пробирки выдерживают при температуре (75±1)°С в течение (30±3) мин, затем быстро охлаждают до комнатной температуры, погружая их в холодную воду.

В зависимости от предполагаемой обсемененности исследуемого жидкого молочного продукта спорами мезофильных анаэробных бактерий из прогретых проб готовят десятикратные разведения в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53430.

Допускается приготовление разведений из непрогретых проб продуктов с последующим совместным прогревом проб исходных продуктов и их разведений при температуре (75±1)°С в течение (30±3) мин.

6.3.2 Подготовка проб сыра и аналогичной по консистенции молочной продукции

В зависимости от предполагаемой обсемененности исследуемого сыра или иной молочной продукции спорами мезофильных анаэробных бактерий из отобранных проб готовят десятикратные разведения в соответствии с нормативными документами стран, присоединившихся к стандарту.

Подготовленные пробирки с разведениями проб сыра или иной молочной продукции вместе с контрольной пробиркой, в которой находятся термометр и 10 см раствора хлористого натрия по 6.2.1 или воды, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (75±1)°С в течение (30±3) мин.

6.4 Проведение анализа

6.4.1 Техника посева споровых анаэробных бактерий

Для создания условий развития анаэробных микроорганизмов могут быть использованы следующие приемы:

- посев в высокий столбик рабочей питательной среды;