ГОСТ 32012-2012 Молоко и молочная продукция. Методы определения содержания спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (Издание с Поправкой)

     7 Метод определения количества спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий

7.1 Сущность метода

Метод основан на способности спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих микроорганизмов (бактерий), сохранившихся после тепловой обработки исследуемого материала или его разведений при температуре (75±1)°С в течение 30 мин, прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в соответствующих дифференциально-диагностических питательных средах.

Метод предназначен для оценки сыропригодности сырого молока или выявления источника микробиологической порчи молочной продукции, в том числе сыров.

7.2 Подготовка к анализу

7.2.1 Растворы хлористого натрия и водного агара готовят по 6.2.1, 6.2.3.

7.2.2 Приготовление мясопептонного бульона

Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают, складывают в кастрюлю; заливают двойным количеством питьевой воды, отмечают первоначальный объем и оставляют на 18-24 ч при температуре (5±1)°С. После этого для ускорения процесса экстракции питательных веществ из мяса содержимое кастрюли подогревают до температуры (50±5)°С, выдерживают в течение 60 мин и затем кипятят 30-40 мин. После кипячения бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, добавляют к нему (1,0±0,1)% бактериологического пептона и (0,5±0,1)% хлористого натрия и устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия массовой долей 20% активную кислотность (7,3±0,1) рН. Подготовленный бульон стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

7.2.3 Приготовление рабочей питательной среды ЛАССА для определения количества спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих бактерий

7.2.3.1 (50±5) г сухой среды ЛАССА вносят в 1 дм дистиллированной воды, тщательно перемешивают, нагревают и кипятят 3-5 мин, не допуская пригорания. В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20-30%-ным раствором гидроокиси натрия или 20%-ным раствором молочной кислоты до значения (5,7±0,1). Полученную рабочую питательную среду разливают в пробирки по (12±1) см, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

7.2.3.2 Допускается приготовление рабочей питательной среды для определения количества спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих бактерий из отдельных ингредиентов.

Для этого к 900 см мясопептонного бульона, приготовленного по 7.2.2, добавляют 5,0 г молочнокислого кальция, 5,0 г уксуснокислого натрия, 0,8 г солянокислого цистеина или 1,0 г аскорбиновой кислоты, 4,0 г сухого дрожжевого автолизата и 20,0 г агара.

Смесь нагревают до температуры (95±2)°С, выдерживают при постоянном помешивании до расплавления агара и добавляют 10 см 0,01%-ного раствора треххлористого железа, 10 см 0,01%-ного раствора тетраборнокислого натрия, 10 см 1%-ного раствора кислого углекислого натрия и 1 см 0,4%-ного раствора индикатора нейтрального красного. С помощью раствора 20%-ной молочной кислоты доводят активную кислотность до (5,70±0,05) рН. Приготовленную смесь разливают в пробирки по 10-12 см, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин. Затем в стерильных условиях ватные пробки заменяют на стерильные резиновые.

Готовая рабочая питательная среда должна иметь интенсивный малиново-красный цвет.

Допускается замена мясопептонного бульона гидролизатом казеина и пептоном. Для этого к 1 дм гидролизата казеина добавляют 10 г пептона, устанавливают рН (7,0±0,1), нагревают до кипения, фильтруют через бумажный фильтр в чистые колбы и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.

7.3 Проведение анализа

7.3.1 Подготовку образцов проводят по 6.3.

7.3.2 Посев образцов проводят по 6.4.1 и 6.4.2, используя рабочую питательную среду для определения лактатсбраживающих анаэробных бактерий.

Культивирование посевов проводят в термостате при температуре (37±1)°С в течение 72 ч.

7.4 Обработка результатов

7.4.1 Рост мезофильных лактатсбраживающих анаэробных спорообразующих бактерий в посевах определяют по изменению цвета рабочей питательной среды с малиново-красного до соломенно-желтого и газообразованию (образованию разрывов столбика агара).

7.4.2 Определение наиболее вероятного числа спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий проводят по 6.5.

Признаки роста споровых анаэробных лактатсбраживающих бактерий на среде ЛАССА представлены в приложении Б.