• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
0 %
Начинаю
Завершаю
Действующий


ГОСТ EN 14132-2013

    
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта

Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in barley and roasted coffee. HPLC method with immunoaffinity column cleanup



МКС 67.140.20

Дата введения 2015-07-01

Предисловие


Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

     Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык европейского стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1916-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14132-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14132:2009* "Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта ("Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in barley and roasted coffee. HPLC method with immunoaffinity column cleanup, IDT).
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных европейских международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.


Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"


1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод определения охратоксина А в ячмене и жареном кофе с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом. Метод прошел валидацию для диапазона содержания охратоксина А в ячмене от 0,1 до 4,5 мкг/кг и в жареном кофе от 0,2 до 5,5 мкг/кг.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

3 Сущность метода


При испытании ячменя охратоксин А экстрагируют из пробы водно-ацетонитрильной смесью, экстракт подвергают очистке на иммуноаффинной колонке. При испытании жареного кофе охратоксин А экстрагируют из измельченной пробы смесью метанола с водным раствором двууглекислого натрия. Экстракт подвергают очистке сначала на колонке с силикагелем, модифицированным фенилсилильными группами, затем на иммуноаффинной колонке. Количественное определение охратоксина А проводят методом ВЭЖХ с применением обращенно-фазовой колонки и флуориметрическим детектированием.

4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использование доступных для приобретения готовых растворов при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

4.2 Натрий хлористый.

4.3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный.

4.4 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.5 Калий хлористый.

4.6 Натрия гидроксид, раствор массовой концентрации ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)(NaOH)=8,0 г/дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Растворяют 8 г гидроксида натрия в 900 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды, объем полученного раствора доводят водой до 1 дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

4.7 Раствор фосфатно-хлоридный буферный

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.2, 1,2 г двузамещенного фосфорнокислого натрия по 4.3, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.4 и 0,2 г хлористого калия по 4.5 в 900 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды. Значение рН полученного раствора доводят до 7,4 ед. рН путем добавления раствора гидроксида натрия по 4.13, после чего объем раствора доводят водой до 1 дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание). В качестве альтернативы допускается использовать доступный для приобретения таблетированный препарат аналогичного состава.

4.8 Натрий двууглекислый, раствор массовой концентрации ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)30 г/дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Растворяют 30 г двууглекислого натрия в 900 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды в мерной колбе вместимостью 1 дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание). Объем содержимого колбы доводят до метки водой.

4.9 Кислота уксусная ледяная массовой долей w ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)98%.

4.10 Метанол.

4.11 Ацетонитрил.

4.12 Толуол.

4.13 Смесь толуола с уксусной кислотой

Смешивают 99 объемных частей толуола по 4.12 с одной объемной частью уксусной кислоты по 4.9.

4.14 Экстрагент для ячменя

Смешивают шесть объемных частей ацетонитрила по 4.11 с четырьмя объемными частями воды.

4.15 Экстрагент для кофе

Смешивают одну объемную часть метанола по 4.10 с одной объемной частью раствора двууглекислого натрия по 4.8.

4.16 Дилюент для приготовления раствора пробы для анализа с помощью ВЭЖХ

Смешивают 30 объемных частей метанола по 4.10 с 70 объемными частями воды и одной объемной частью уксусной кислоты по 4.9.

4.17 Подвижная фаза

Смешивают 102 объемные части воды с 96 объемными частями ацетонитрила по 4.11 и двумя объемными частями уксусной кислоты по 4.9. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр диаметром пор 0,2 мкм по 5.12. Перед использованием подвижную фазу дегазируют.

4.18 Раствор 1 для промывания колонки с фенилсилильным сорбентом

Смешивают 20 объемных частей метанола по 4.10 с 80 объемными частями раствора двууглекислого натрия по 4.8.

4.19 Раствор 2 для промывания колонки с фенилсилильным сорбентом массовой концентрации двууглекислого натрия ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1 г/100 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Растворяют 1 г двууглекислого натрия в 90 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды в мерной колбе вместимостью 100 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), объем содержимого в колбе доводят водой до метки.

4.20 Элюент для очистки экстракта на фенилсилильной колонке

Смешивают семь объемных частей метанола по 4.10 с 93 объемными частями воды.

4.21 Охратоксин А, основной раствор

Для приготовления основного раствора 1 мг кристаллического охратоксина А или, при использовании ампульного препарата в пленочной форме, содержимое одной ампулы растворяют в таком объеме смеси толуола с уксусной кислотой по 4.13, чтобы массовая концентрация охратоксина А в полученном растворе составила от 20 до 30 мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

Для определения точной массовой концентрации охратоксина А в основном растворе регистрируют его оптическую плотность в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм с интервалом 5 нм в кварцевой кювете длиной оптического пути 1 см по 5.14. В качестве раствора сравнения используют смесь толуола с уксусной кислотой по 4.13. По полученному спектру определяют длину волны, соответствующую максимальной оптической плотности. Массовую концентрацию охратоксина А, ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), рассчитывают по формуле

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), (1)


где ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - максимальное значение оптической плотности в данном диапазоне длин волн (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)333 нм);

М - молярная масса охратоксина А, г/моль (М=403,8 г/моль);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - молярный коэффициент поглощения охратоксина А в смешанном растворителе по 4.13, мГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/моль (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)544 мГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/моль);

b - длина оптического пути кюветы, см.

Основной раствор хранят при температуре около минус 18°С, при этом срок его годности составляет не менее четырех лет.

4.22 Охратоксин А, стандартный раствор промежуточной массовой концентрации

Раствор готовят разбавлением основного раствора по 4.21 смесью толуола с уксусной кислотой по 4.13 до получения раствора массовой концентрации охратоксина А 10 мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

Раствор хранят в холодильнике при температуре около 4°С. Перед использованием проверяют соответствие фактической массовой концентрации охратоксина А номинальному значению.

4.23 Охратоксин А, стандартный раствор для приготовления градуировочных растворов

В стеклянный флакон помещают 200 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) стандартного раствора охратоксина А массовой концентрации 10 мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) по 4.22. Раствор разбавляют до объема 1 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) путем добавления 800 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) смеси толуола с уксусной кислотой по 4.13, получают раствор охратоксина А массовой концентрации 2 мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание). Порцию полученного раствора объемом 100 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) переносят микропипеткой в другой стеклянный флакон по 5.2, удаляют растворитель в токе азота, сухой остаток перерастворяют в 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) дилюента по 4.16, предварительно фильтрованного через мембранный фильтр размером пор 0,2 мкм по 5.12. Массовая концентрация охратоксина А в полученном растворе составляет 20 нг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание). Раствор готовят в день проведения испытания.

4.24 Охратоксин А, раствор для внесения в пробу при контроле полноты обнаружения

В стеклянный флакон вносят микропипеткой 100 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) стандартного раствора охратоксина А массовой концентрации 10 мкг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) по 4.22. Объем содержимого флакона доводят до 2 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) добавлением 1,9 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) смеси толуола с уксусной кислотой по 4.13. Массовая концентрация охратоксина А в полученном растворе составляет 500 нг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

4.25 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом, содержащим иммобилизованные антитела, специфичные в отношении охратоксина А, имеющая сорбционную емкость по охратоксину А не менее 100 нг. Каждую партию колонок проверяют на пригодность для использования путем внесения в колонку 100 нг охратоксина А в растворителе, идентичном растворителю экстракта из пробы при его внесении в колонку по 6.1.2, при этом полнота обнаружения охратоксина А должна быть не менее 85%.

4.26 Колонка для твердофазной экстракции с силикагелем, модифицированным фенилсилильными группами

Для проведения испытания пригодна колонка, содержащая 500 мг сорбента, с резервуаром вместимостью 3 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), толщиной слоя сорбента, достаточной для предотвращения потерь аналита из-за его прохождения сквозь колонку без связывания. Сорбционная емкость колонки по охратоксину А должна быть не меньше 100 нг. Колонка должна обеспечивать полноту обнаружения не менее 85% при внесении в нее 100 нг охратоксина А в растворителе, идентичном экстрагенту для кофе по 4.15.

5 Приборы и оборудование


При проведении испытания используют общеупотребительное лабораторное оборудование, в частности, перечисленное ниже.

5.1 Весы аналитические, пригодные для взвешивания с точностью до 0,01 мг.

5.2 Флаконы стеклянные вместимостью 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

При использовании некоторых стеклянных флаконов возможны потери охратоксина А при выпаривании раствора. Для их предотвращения внутреннюю поверхность флаконов силанизируют, для чего флаконы заполняют силанизирующим реактивом и оставляют в покое на 1 мин. Затем флаконы дважды ополаскивают сначала растворителем (толуолом, ацетоном или гексаном), затем водой, после чего высушивают.

5.3 Блендер лабораторный взрывозащищенного исполнения с контейнером вместимостью 1 дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), снабженным крышкой, обеспечивающий скорость вращения диспергирующего элемента до 20000 минГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

5.4 Пипетки автоматические вместимостью 200 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), 1 и 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) в комплекте с подходящими наконечниками.

5.5 Устройство для вакуумной фильтрации многопозиционное, приспособленное для установки иммуноаффинных и фенилсилильных колонок (манифолд).

5.6 Резервуары для элюента в комплекте с приспособлениями для установки иммуноаффинных колонок.

5.7 Насос вакуумный, обеспечивающий разрежение 10 мбар производительностью не менее 18 дмГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин.

5.8 Встряхиватель лабораторный.

5.9 Центрифуга лабораторная рефрижераторная, обеспечивающая центробежное ускорение 1300 g и рабочую температуру 4°С.

5.10 Пробирки центрифужные вместимостью 50 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

5.11 Фильтры бумажные размером пор от 20 до 25 мкм или аналогичные.

5.12 Фильтры мембранные полисульфоновые шприцевые размером пор 0,2 мкм, диаметром 25 мм.

5.13 Система для ВЭЖХ в указанной ниже комплектации

5.13.1 Инжектор петлевого типа, обеспечивающий объем инжекции 100 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание).

5.13.2 Насос для подачи подвижной фазы, работающий в изократическом режиме, обеспечивающий скорость подачи подвижной фазы 1 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин.

5.13.3 Колонка для ВЭЖХ аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, например с привитыми октадецильными группами (ODS), обеспечивающая отделение пика охратоксина А от сопутствующих пиков матрицы пробы. Перекрывание пика охратоксина А другими пиками не должно превышать 10% его высоты. При необходимости для достижения требуемой степени разделения пиков проводят корректировку состава подвижной фазы. Для предотвращения потери работоспособности аналитической колонки рекомендуется использовать защитную колонку.

5.13.4 Детектор флуоориметрический с проточной кюветой, пригодный для проведения измерений при длинах волн возбуждения и эмиссии соответственно 333 и 460 нм.

5.13.5 Компьютерная система обработки данных.

5.14 Спектрофотометр, пригодный для измерений оптической плотности в ультрафиолетовой области спектра, в комплекте с кварцевыми кюветами.

6 Процедура проведения испытания

6.1 Определение охратоксина А в ячмене

6.1.1 Экстракция

Лабораторную пробу измельчают до частиц, проходящих через сито размером ячейки 0,5 мм. 25 г пробы для анализа, взвешенной с точностью до 0,1 г, помещают в контейнер блендера по 5.3. В контейнер добавляют 100 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) экстрагента по 4.14, контейнер закрывают крышкой и гомогенизируют его содержимое в течение 3 мин при скорости вращения диспергирующего элемента 20000 минГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание). Экстракт фильтруют через бумажный фильтр по 5.11.

6.1.2 Очистка экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом

Иммуноаффинную колонку подготавливают к использованию в соответствии с инструкциями изготовителя.

Аликвоту фильтрата, полученного по 6.1.1, объемом 4 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) переносят с помощью пипетки в стакан, куда добавляют 44 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) фосфатно-хлоридного буферного раствора по 4.7. Иммуноаффинную колонку по 4.25 устанавливают в вакуумный манифолд, к входному концу колонки присоединяют резервуар по 5.6. В резервуар вносят экстракт, разбавленный фосфатно-хлоридным буферным раствором, и пропускают его через колонку со скоростью не более 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин. При этом не допускают попадания в колонку воздуха. Колонку промывают 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды, после чего ее отсоединяют от манифолда и высушивают путем пропускания через нее воздуха не менее чем в двукратном объеме. Затем колонку устанавливают над стеклянным флаконом по 5.2, предназначенным для сбора элюата.

6.1.3 Приготовление раствора пробы для хроматографического анализа

Охратоксин А элюируют с использованием подходящего растворителя в соответствии с рекомендациями изготовителя колонки. Элюат собирают в стеклянный флакон по 5.2. По окончании элюирования растворитель удаляют в токе азота при температуре около 50°С. Сухой остаток перерастворяют в 1,0 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) дилюента по 4.16 (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), раствор фильтруют через мембранный фильтр размером пор 0,2 мкм по 5.12. Полученный раствор пробы для хроматографического анализа переносят во флакон автосамплера хроматографа.

6.2 Определение охратоксина А в жареном кофе

6.2.1 Экстракция

Лабораторную пробу измельчают до частиц, проходящих через сито размером ячейки 1 мм. Пробу для анализа массой 15 г, взвешенной с точностью до 0,1 г, помещают в коническую колбу вместимостью 500 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), куда добавляют 150 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) экстрагента по 4.15. Колбу закрывают пробкой, содержимое колбы встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр по 5.11. Порцию фильтрата объемом 50 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) помещают в центрифужную пробирку по 5.10 и центрифугируют при центробежном ускорении 1300 g в течение 15 мин при температуре 4°С.

6.2.2 Очистка экстракта на колонке с фенилсилильным сорбентом

Колонку с фенилсилильным сорбентом по 4.26 устанавливают в вакуумный манифолд по 5.5. На стадии подготовки колонки к использованию не следует применять разрежение. При необходимости скорость протока растворителя через колонку увеличивают, создавая некоторое избыточное давление с помощью азота. Колонку кондиционируют, пропуская через нее сначала 15 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) метанола, затем 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) раствора двууглекислого натрия по 4.8, элюат отбрасывают.

Аликвоту прозрачного центрифугированного экстракта по 6.2.1 объемом 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) помещают в стакан, куда добавляют 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) раствора двууглекислого натрия по 4.8. Разбавленный таким образом экстракт пропускают через фенилсилильную колонку, при этом скорость протока не должна превышать 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин. Далее через колонку пропускают сначала 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) промывного раствора 1 по 4.18, затем 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) промывного раствора 2 по 4.19, при этом скорость протока также не должна превышать 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин. После этого колонку отсоединяют от манифолда и высушивают путем пропускания через нее с помощью шприца не менее 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воздуха. Затем колонку устанавливают над стеклянным флаконом подходящей вместимости и элюируют охратоксин А с помощью 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) элюента по 4.20 при скорости протока, не превышающей 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин.

6.2.3 Очистка экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом

Полученный по 6.2.2 элюат разбавляют 30 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) фосфатно-хлоридного буферного раствора по 4.7. Иммуноаффинную колонку по 4.25 устанавливают в вакуумный манифолд, к входному концу колонки присоединяют резервуар по 5.6. В резервуар вносят элюат, разбавленный фосфатно-хлоридным буферным раствором, и пропускают его через колонку со скоростью не более 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин. При этом не допускается попадание в колонку воздуха. Колонку промывают 10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) воды, после чего ее отсоединяют от манифолда и помещают над стеклянным флаконом по 5.2, предназначенным для сбора элюата.

6.2.4 Приготовление раствора пробы для хроматографического анализа

Охратоксин А элюируют четырьмя порциями элюента, указанного в инструкции по применению колонки, объемом 1 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) каждая, элюат собирают во флакон по 5.2. По окончании элюирования растворитель удаляют в токе азота при температуре около 50°С. Сухой остаток перерастворяют в 1,0 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) дилюента по 4.16 (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), раствор фильтруют через мембранный фильтр размером пор 0,2 мкм по 5.12. Полученный раствор пробы для хроматографического анализа переносят во флакон автосамплера хроматографа.

7 Процедура проведения испытания пробы с добавкой охратоксина А

7.1 Испытание пробы ячменя с добавкой охратоксина А

Пробу для анализа массой 25 г, взвешенной с точностью до 0,1 г, помещают в контейнер блендера, куда затем добавляют 200 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) раствора охратоксина А по 4.24. Контейнер с пробой оставляют на ночь в вытяжном шкафу для удаления растворителя. Дальнейшую процедуру проводят в соответствии с 6.1.

7.2 Испытание пробы жареного кофе с добавкой охратоксина А

Пробу кофе измельчают до частиц, проходящих через сито размером ячейки 1 мм. Отбирают пробу для анализа массой 15 г, взвешенной с точностью до 0,1 г, и помещают ее в коническую колбу вместимостью 500 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), куда затем вносят 120 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) раствора охратоксина А по 4.24. Контейнер с пробой оставляют на ночь в вытяжном шкафу для удаления растворителя. Дальнейшую процедуру проводят в соответствии с 6.2.

8 Анализ с помощью ВЭЖХ

8.1 Приготовление градуировочных растворов

Градуировку осуществляют в день проведения испытания перед хроматографическим анализом растворов проб или в случае изменения условий хроматографического анализа.

Готовят пять градуировочных растворов в соответствии с таблицей 1, для чего в мерные колбы вместимостью по 5 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) пипеткой вносят различные объемы стандартного раствора по 4.23, объем содержимого в колбах доводят до метки дилюентом по 4.16, фильтрованным через мембранный фильтр.


Таблица 1 - Приготовление градуировочных растворов

Градуировочный раствор

Объем стандартного раствора по 4.23, взятый для приготовления градуировочного раствора, ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Объем дилюента по 4.16, использованный для приготовления градуировочного раствора, ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Массовая концентрация охратоксина А в градуировочном растворе, нг/смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

1

125

4875

0,5

2

250

4750

1,0

3

500

4500

2,0

4

1250

3750

5,0

5

2500

2500

10,0

8.2 Условия хроматографического анализа

Приведенные ниже параметры обеспечивают приемлемое качество хроматографического анализа при использовании аналитической колонки по 5.13.3 длиной 250 мм, внутренним диаметром 4.6 мм и диаметром частиц сорбента 5 мкм.

Скорость подачи подвижной фазы - 1,0 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)/мин.

Параметры работы флуориметрического детектора: длина волны возбуждения 333 нм, длина волны эмиссии 460 нм.

Объем инжекции - 100 ммГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)).

8.3 Идентификация пика аналита

Пик охратоксина А на хроматограмме раствора пробы идентифицируют по совпадению его времени удерживания с временем удерживания пика охратоксина А на хроматограммах градуировочных растворов. При возникновении сомнений в правильности идентификации пик охратоксина А на хроматограмме раствора пробы идентифицируют путем ее сопоставления с хроматограммой раствора пробы с добавлением градуировочного раствора охратоксина А.

8.4 Количественное определение

Количественное определение проводят по методу внешнего стандарта. При этом либо осуществляют градуировку по одному градуировочному раствору, площадь или высота пика аналита на хроматограмме которого наиболее близки к площади или высоте пика аналита на хроматограмме раствора пробы, либо используют градуировочный график. В последнем случае проводят анализ нескольких градуировочных растворов, при этом необходимо, чтобы массовые концентрации охратоксина А в них находились в пределах линейного участка градуировочной зависимости.

Соблюдают одинаковые объемы инжекции при анализе раствора пробы и градуировочных растворов.

Если аналитический сигнал, относящийся к пику охратоксина А в растворе пробы, выходит за верхнюю границу диапазона градуировки, раствор пробы разбавляют в необходимой мере.

9 Обработка результатов


По градуировочной характеристике определяют массу охратоксина А, нг, в инжектированной аликвоте раствора пробы.

Содержание охратоксина А в пробе, ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг, рассчитывают по формуле

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), (2)


где ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - масса охратоксина А в инжектированной аликвоте раствора пробы, нг;

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - масса анализируемой пробы, г (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)25 г для ячменя и ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)15 г для кофе);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - объем приготовленного раствора пробы для хроматографического анализа по 6.1.3 и 6.2.3, смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1,0 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание));

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - объем экстрагента, использованный для экстракции, смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)100 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) для ячменя и ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)150 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) для кофе);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - объем инжекции раствора пробы для хроматографического анализа по 6.2, смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) - объем аликвоты экстракта, отобранной для очистки на иммуноаффинной колонке, смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)4,0 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) для ячменя по 6.2.1 и ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)10 смГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание) для кофе по 6.2.2).

Результат испытания выражают в микрограммах на килограмм, или в нанограммах на грамм.

10 Презиционность

_______________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

10.1 Общие положения

Подробности межлабораторных испытаний по определению прецизионности метода приведены в приложении А. Значения метрологических характеристик, полученные в результате межлабораторных испытаний, могут быть не применимы к другим содержаниям аналита и другим типам матриц, чем те, что указаны в приложении А.

10.2 Повторяемость

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования в течение короткого промежутка времени, не должно превышать предел повторяемости r более чем в 5% случаев.

Значения предела повторяемости для ячменя равны:

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)0,1 мкг/кг...r=0,112 мкг/кг (холостая проба);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1,3 мкг/кг...r=0,896 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,0 мкг/кг...r=1,036 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,7 мкг/кг...r=0,448 мкг/кг (проба с добавкой охратоксина А);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)4,5 мкг/кг...r=1,792 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем).

Значения предела повторяемости для кофе равны:

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)0,2 мкг/кг...r=0,112 мкг/кг (холостая проба);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1,2 мкг/кг...r=0,756 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)2,7 мкг/кг...r=0,868 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,5 мкг/кг...r=0,588 мкг/кг (проба с добавкой охратоксина А);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)5,5 мкг/кг...r=0,308 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем).

10.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, не должно превышать предел воспроизводимости R более чем в 5% случаев.

Значения предела воспроизводимости для ячменя равны:

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)0,1 мкг/кг...R=0,280 мкг/кг (холостая проба);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1,3 мкг/кг...R=1,232 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,0 мкг/кг...R=1,456 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,7 мкг/кг...R=1,204 мкг/кг (проба с добавкой охратоксина А);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)4,5 мкг/кг...R=1,876 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем).

Значения предела воспроизводимости для кофе равны:

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)0,2 мкг/кг...R=0,308 мкг/кг (холостая проба);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)1,2 мкг/кг...R=0,896 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)2,7 мкг/кг...R=1,120 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)3,5 мкг/кг...R=1,288 мкг/кг (проба с добавкой охратоксина А);

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)5,5 мкг/кг...R=2,184 мкг/кг (проба, загрязненная охратоксином А естественным путем).

11 Протокол испытаний


Протокол испытаний должен содержать как минимум следующие сведения:

a) всю информацию, необходимую для идентификации пробы;

b) ссылку на настоящий стандарт;

c) дату и время отбора пробы (если известны);

d) дату поступления пробы в лабораторию;

e) дату проведения испытания;

f) результаты испытания с указанием единиц измерения;

g) все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;

h) все операции, не оговоренные в методике или рассматриваемые как необязательные, которые могли повлиять на результат испытания.

Приложение А (справочное). Данные по прецизионности метода

Приложение А
(справочное)



Приведенные в таблицах А.1 и А.2 данные получены в результате межлабораторных испытаний [2], [3], организованных в соответствии с [4].


Таблица А.1 - Данные по прецизионности метода для ячменя

Наименование показателя

Холостая проба*

Проба с низким уровнем содержания охратоксина А

Проба со средним уровнем содержания охратоксина А

Проба с высоким уровнем содержания охратоксина А

Проба с добавленным охратоксином А

Год проведения испытаний

1998-1999

1998-1999

1998-1999

1998-1999

1998-1999

Количество лабораторий-
участников

15

15

15

15

15

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

14

15

14

12

12

Количество выбросов (лабораторий)

1

0

1

3

3

Число принятых результатов

14

15

14

12

12

Среднее значение ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,1

1,3

3,0

4,5

3,7

Стандартное отклонение повторяемости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,04

0,32

0,37

0,64

0,16

Относительное стандартное отклонение повторяемости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), %

26

24

12

14

4

Предел повторяемости r (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), мкг/кг

0,112

0,896

1,036

1,792

0,448

Стандартное отклонение воспроизводимости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,10

0,44

0,52

0,67

0,43

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), %

72

33

17

15

12

Предел воспроизводимости R (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), мкг/кг

0,280

1,232

1,456

1,876

1,204

Полнота обнаружения, %

-

-

-

-

93±10

* Результат испытания холостой пробы находится на уровне предела обнаружения.



Таблица А.2 Данные по прецизионности методики для жареного кофе

Наименование показателя

Холостая проба*

Проба с низким уровнем содержания охратоксина А

Проба со средним уровнем содержания охратоксина А

Проба с высоким уровнем содержания охратоксина А

Проба с добавленным охратоксином А

Год проведения испытаний

1998-1999

1998-1999

1998-1999

1998-1999

1998-1999

Количество лабораторий-
участников

15

15

15

15

15

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

14

15

14

12

13

Количество выбросов (лабораторий)

1

0

1

3

2

Число принятых результатов

14

15

14

12

13

Среднее значение ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,2

1,2

2,7

5,5

3,5

Стандартное отклонение повторяемости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,04

0,27

0,31

0,11

0,21

Относительное стандартное отклонение повторяемости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), %

28

22

11

2

6

Предел повторяемости r (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), мкг/кг

0,112

0,756

0,868

0,308

0,588

Стандартное отклонение воспроизводимости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), мкг/кг

0,11

0,32

0,40

0,78

0,46

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание), %

71

26

15

14

13

Предел воспроизводимости R (ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)), мкг/кг

0,308

0,896

1,120

2,184

1,288

Полнота обнаружения, %

-

-

-

-

88±15

* Результат испытания холостой пробы находится на уровне предела обнаружения.

Приложение ДА (справочное). Сведения о соответствии ссылочных европейских стандартов межгосударственным стандартам

Приложение ДА
(справочное)



Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного европейского стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

EN ISO 3696

-

*

* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного европейского регионального стандарта или гармонизированный с ним национальный (государственный) стандарт страны, на территории которой применяется настоящий стандарт.

Библиография

[1]

Castegnaro М., Barek J., Fremy J.M., Lafontaine M., Miraglia M., Sansone E.В. and Telling G.M.: Laboratory decontamination and destruction of carcinogens in laboratory wastes: some mycotoxins. IARC Scientific Publication No. 113, International Agency for Research on Cancer, Lyon (France), 1991, 63 p.

[2]

EC, BRC Information, Report on Workpackage 4.9: Immunoaffinity Column Clean-up with Liquid Chromatography for the Determination of Ochratoxin A in Barley: Collaborative Study, Contract No. SMT4-CT96-2045, 1999, EUR 18954 EN

[3]

EC, BRC Information, Report on Workpackage 4.9: Combined Phenyl Silane & Immunoaffinity Column Clean-up HPLC Method for the Determination of Ochratoxin A in Roasted Coffee: Collaborative Study, Contract No. SMT4-CT96-2045, 2000, EUR 19504 EN

[4]

Guidelines for Collaborative Study to Validate Characteristics of a Method of Analysis J.AOAC Int., 1989, 72, 694-704


УДК 633.16:663.93:006.354

МКС 67.140.20

IDT

Ключевые слова: продукты пищевые, определение охратоксина А, ячмень, кофе жареный, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, очистка экстракта на иммуноаффинной колонке, флуориметрическое детектирование




Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2019

ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Название документа: ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)

Номер документа: EN 14132-2013

Вид документа: ГОСТ

Принявший орган: Росстандарт

Статус: Действующий

Опубликован: Официальное издание. М.: Стандартинформ, 2019 год
Дата принятия: 22 ноября 2013

Дата начала действия: 01 июля 2015
Дата редакции: 01 декабря 2019
ГОСТ EN 14132-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта (Переиздание)
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или