ГОСТ 13496.20-2014 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения остаточных количеств пестицидов (Издание с Изменением N 1)

     10 Проведение испытаний

10.1 Экстракция

20,00 г анализируемой пробы, взвешенной с погрешностью ±0,01 г, помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 см (см. 6.2.12), заливают 50 см ацетона (см. 6.3.1) и перемешивают на аппарате для встряхивания (см. 6.2.1) в течение 1 ч.

Экстракт фильтруют через воронку (см. 6.2.10) с бумажным фильтром (см. 6.2.22) в колбу для отгонки ротационного испарителя (см. 6.2.6) или выпарительную чашку (см. 6.2.16). Затем повторяют экстракцию пробы таким же количеством ацетона и фильтруют экстракт. Экстракты объединяют. Фильтр промывают двумя порциями ацетона по 5-10 см.

Допускается экстракцию проводить следующим способом: залитую ацетоном анализируемую пробу оставляют на 12-15 ч (как правило, на ночь) и экстрагируют, встряхивая на аппарате в течение 1 ч.

Ацетон из объединенного экстракта испаряют на вакуумном ротационном испарителе (см. 6.2.6). Допускается испарять ацетон под тягой в вытяжном шкафу при комнатной температуре или, для ускорения испарения, на водяной бане (см. 6.2.4) при температуре не выше 50°С.

Маслянистый остаток растворяют в 5 см гексана и количественно переносят содержимое в хроматографическую колонку, подготовленную по 9.7, омывая чашку еще тремя порциями гексана по 3-5 см. Колонку продувают с помощью резиновой груши, прошедший через колонку гексан отбрасывают.

Затем пестициды извлекают (элюируют), пропуская 100 см гексана через колонку порциями по 10-20 см. Элюат концентрируют до объема нескольких капель на вакуумном ротационном испарителе или под тягой вытяжного шкафа.

10.2 Очистка экстракта

Если концентрированный элюат маслянистый или темный, то его очищают концентрированной серной кислотой. Для этого его количественно переносят в делительную воронку (см. 6.2.11), омывая колбу (чашку) двумя-тремя порциями гексана по 2-3 см, добавляют концентрированную серную кислоту (см. 6.3.3) порциями по 20 см, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 1 мин.

После расслоения нижний (кислотный) слой отбрасывают.

Очистку повторяют от двух до шести раз до прекращения окрашивания нижнего слоя (серной кислоты) в желтый цвет.

Удалив кислоту, элюат промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, контроль рН проводят по индикаторной бумаге (см. 6.2.21). Промытый элюат фильтруют через воронку с сернокислым натрием (см. 6.3.4) в колбу (или чашку). Делительную воронку и сернокислый натрий промывают двумя порциями гексана по 5 см.

Очищенный элюат концентрируют до объема нескольких капель.

10.3 Хроматографическая идентификация пестицидов

Концентрированный элюат наносят пипеткой Пастера или микрошприцем (см. 6.2.9) на подготовленную хроматографическую пластинку (см. 9.4) на расстоянии 15 мм (линия старта) от ее нижнего края. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. Чашку (колбу) смывают тремя порциями гексана по 0,2 см, которые наносят в центр этого же пятна периодическими прикосновениями пипетки. Справа и слева на расстоянии 20 мм от пробы наносят в три точки рабочие стандартные растворы, содержащие 4,0; 1,0; 0,5 мкг пестицида. Допускается наносить рабочие стандартные растворы другой концентрации пестицида.

На дно хроматографической камеры (см. 6.2.5) наливают гексан на высоту 5-7 мм. Через 30 мин в камеру помещают пластинку с нанесенными растворами.

После того как линия фронта подвижного растворителя (гексана) поднимется на 100 мм от линии старта, пластинку вынимают из камеры и дают испариться растворителю в течение 1-2 мин. Затем пластинку снова помещают в эту же камеру и дают опять подняться растворителю на высоту 100 мм от линии старта. Пластинку вынимают, высушивают на воздухе, опрыскивают с помощью пульверизатора (см. 6.2.14) проявляющим реактивом (см. 9.3), высушивают и помещают под УФ-лучи ртутно-кварцевой лампы (см. 6.2.7) на 10-15 мин.

При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета на белом фоне, которые располагаются в следующем порядке (снизу вверх): -ГХЦГ, -ГХЦГ, ДДД, -ГХЦГ, ДДТ, ДДЕ.

Для количественного определения пестицида проводят измерение площадей пятна пробы и пятен стандарта пестицида, учитывая визуально интенсивность их окрасок.

Окрашенные пятна копируют на кальку (см. 6.2.23), их площадь вычисляют с помощью масштабно-координатной бумаги (см. 6.2.20).

Примечание - Каждый разделенный пестицид можно количественно определить другими методами. Для этого необходимо снять с хроматографической пластины слой сорбента окрашенного пятна соответствующего пестицида, экстрагировать из него пестицид и определить его содержание методом спектрофотометрии, люминесцентным, флуоресцентным или другим методом.

(Измененная редакция, Изм. N 1).