МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ ОБЯЗАТЕЛЬНОГО МИНИМУМА ИССЛЕДОВАНИЙ В ВЕТЕРИНАРНЫХ ЛАБОРАТОРИЯХ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ
УТВЕРЖДЕНЫ Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 24 июня 1971 года
ВЗАМЕН Методических указаний от 10 сентября 1950 года, дополнений и изменений к ним от 26 января 1963 года, 19 мая 1964 года и 11 декабря 1970 года
ОБЩАЯ ЧАСТЬ
1. Настоящие Методические указания определяют методы и сроки исследования патологического материала, проб кормов, воды и других материалов, являющиеся обязательным минимумом для ветеринарных лабораторий и диагностических отделов НИВС и НИВИ при диагностике болезней животных (включая птиц, пушных зверей, рыб и пчел).
2. Приведенные в Указаниях показатели, касающиеся набора сред, применяемых при бактериологических исследованиях, равно как и видов, и количества заражаемых подопытных животных, являются минимальными. Сроки исследований (сообщения их результатов и заключений) считаются предельными для каждой болезни.
3. Исследование патологического материала в ветеринарных лабораториях выполняют в порядке его поступления.
Материал на острозаразные болезни (сибирская язва, эмфизематозный карбункул, чума и рожа свиней и т.д.), а также мясо животных исследуют вне очереди. Немедленной обработке подвергают также материал, время пригодности которого для исследования ограничено (материал для бактериологического исследования на лептоспироз, вибриоз, трихомоноз, диплококковую септицемию и т.п.).
В целях равномерной загрузки лабораторий массовые исследования на сап, бруцеллез и другие болезни лаборатории проводят по соответствующему календарному плану, согласованному с главным ветеринарным врачом района.
4. Весь поступающий в ветеринарные лаборатории материал регистрируют в соответствующих журналах (формы журналов и порядок их заполнения приведены в "Инструкции по ветеринарному учету и ветеринарной отчетности").
5. О результатах исследования лаборатории обязаны сообщать организациям, учреждениям, хозяйствам и предприятиям, приславшим материал, не позднее чем в сроки, установленные настоящими Указаниями, по формам согласно Приложениям 1, 2 и 3.
В случае установления особо опасной инфекционной болезни в материале, присланном специалистом хозяйства (предприятия), ветеринарного участка (пункта), лаборатория обязана одновременно сообщить об этом главному ветеринарному врачу района (города) по местонахождению хозяйства.
6. Ответ лаборатории о результатах исследования должен быть подробным и понятным. В ответе указывают причины заболевания или смерти животного и рекомендуемые меры борьбы с установленной болезнью, а в необходимых случаях дают указания о присылке материала для дополнительного исследования.
7. При проведении бактериологических и биологических исследований материала специалист лаборатории обязан использовать минимум питательных сред для его посева, требующихся для получения культуры, и минимум подопытных животных, подлежащих заражению материалом (или культурой), приведенным в настоящих Указаниях по соответствующим болезням. В необходимых случаях проводят дополнительные посевы и заражают дополнительное количество подопытных животных.
СПЕЦИАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
I. Бактериальные инфекции
8. Сибирская язва. Материал на сибирскую язву исследуют путем микроскопии мазков, посева на обычные среды (МПБ, МПА) и заражения лабораторных животных; при необходимости ставят реакцию преципитации.
Окраска мазков обязательно по Граму и на капсулы. По результатам микроскопического исследования дают немедленно предварительное заключение.
Идентификацию выделенной культуры проводят по характеру роста, морфологии микроба, капсулообразованию. В сомнительных случаях определяют подвижность, гемолитические свойства, феномен "ожерелья" и проводят фаготипирование, а также заражают лабораторных животных. Срок бактериологического исследования - 1-3 дня.
Биологическое исследование проводят путем подкожного заражения двух белых мышей или двух морских свинок суспензией из исходного материала в дозе соответственно по 0,1-0,2 и по 0,5-1 мл. Срок наблюдения до 10 дней.
Реакцию преципитации ставят в соответствии с наставлением по этому вопросу. Экстрагирование проводят холодным и горячим способами. Свежий материал перед экстрагированием выдерживают 18-20 часов в термостате.
Окончательное заключение дают на основании идентификации выделенной чистой культуры и результата биологического исследования или в случае исследования загнившего материала при наличии положительной реакции преципитации.
9. Эмфизематозный карбункул крупного рогатого скота и овец. Диагноз в лаборатории ставят на основании результатов бактериологического и биологического исследований. Окончательный диагноз в хозяйстве устанавливают с учетом клинических и эпизоотологических данных и патологоанатомических изменений.
Исследования проводят путем микроскопии мазков (окраска по Граму или по Муромцеву), высевов из мышц и органов на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА. Культуру идентифицируют по характеру роста на глюкозо-кровяном агаре, морфологии микроба и патологоанатомическим изменениям у морских свинок (не менее двух), заражаемых одновременно с посевами суспензией из мышц подкожно в области живота в дозе 1 мл.
Срок лабораторного исследования до 8 дней.
10. Злокачественный отек. Материал исследуют микроскопией мазков (окрашенных по Граму или Муромцеву), бактериологическим и биологическим методами. Посевы из мышц и органов проводят на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА. Идентификацию культур проводят, как указано в пункте 9.
Одновременно с посевами заражают двух морских свинок подкожно в области живота суспензией из патологического материала в дозе 1 мл.
Срок исследования до 8 дней.
11. Брадзот овец. Исследование проводят путем микроскопии мазков (окрашенных по Граму или Муромцеву), бактериологического и биологического исследований.
Посевы из органов, отечных инфильтратов подкожной клетчатки и подслизистой сычуга делают на среду Китт-Тароцци, МПБ и МПА.
Биологическое исследование проводят на двух морских свинках, которых заражают суспензией из материала подкожно в области живота в дозе 0,5-1 мл.
Культуру возбудителей идентифицируют, как указано в пункте 9.
Окончательный диагноз в хозяйстве ставят на основании результатов исследований с учетом эпизоотологии, клиники заболевания и патологоанатомических данных.
Срок исследования до 8 дней.
12. Инфекционная энтеротоксемия овец. Лабораторный диагноз на инфекционную энтеротоксемию устанавливают на основании обнаружения токсина в содержимом тонкого кишечника или выделения культуры возбудителя. Окончательный диагноз определяют с учетом клинической картины и патологоанатомических изменений, а также сезонности заболевания.
Для обнаружения токсина в содержимом тонкого отдела кишечника вводят внутривенно или внутрибрюшинно фильтрат содержимого двум белым мышам или внутривенно одному кролику в соответствии с наставлением по использованию антитоксических сывороток для диагностики заболеваний овец, вызываемых микробами клостридиум перфрингенс. Определение типа токсина при помощи типоспецифических сывороток проводят, руководствуясь тем же наставлением.
Исследование проводят также путем выделения культуры возбудителя с последующей ее типизацией. Посевы проводят из содержимого кишечника и паренхиматозных органов на среду Китт-Тароцци, МПА и МПБ. Культуру идентифицируют по культуральным и морфологическим свойствам. Тип выделенной культуры определяют при помощи антитоксических сывороток согласно наставлению.
Срок исследования до 8 дней.
13. Анаэробная дизентерия ягнят. Исследование проводят, как и при диагностике инфекционной энтеротоксемии овец (пункт 12).
Окончательный диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных с учетом возраста (1-5, редко 7-14 дней) животных. Срок исследования до 8 дней.
14. Некробактериоз. Диагноз в лаборатории устанавливают на основании микроскопического, бактериологического и биологического исследований. В хозяйстве окончательный диагноз устанавливают также с учетом клинических признаков и патологоанатомических изменений.
На основании данных микроскопии мазков, окрашенных по Муромцеву, Романовскому-Гимза или синькой Леффлера, ставят предварительный диагноз.
Материал высевают на среду Китт-Тароцци.
Для биологического исследования заражают одного кролика под кожу уха в дозе 0,5-1 мл взвесью материала. Биопроба считается положительной при развитии у кролика некротического очага на месте введения взвеси и обнаружении в мазках из него типичных микробов.
Срок исследования до 10 дней.
15. Столбняк. Диагноз ставят на основании результатов микроскопического, бактериологического и биологического исследований с учетом клинической картины.
Мазки из материала окрашивают по Граму.
Посевы из материала делают на среду Китт-Тароцци в двойном количестве пробирок с обязательным прогреванием половины засеянных пробирок при 80° 20 минут.
Культуру идентифицируют по морфологическим свойствам, характеру роста на глюкозо-кровяном агаре и токсинообразованию. Токсичность культуры проверяют путем заражения двух белых мышей или двух морских свинок подкожно в заднюю ножку фильтратом 8-10-суточной культуры в дозе 0,3-0,5 мл. О наличии токсина судят по клинической картине.
Заражение лабораторных животных патологическим материалом проводят так же, как и культурой.
Срок исследования до 14 дней.
16. Ботулизм. Диагноз ставят на основании бактериологического и биологического исследований.
Материал исследуют одновременно на обнаружение ботулинических токсинов и выделение возбудителя.
Для обнаружения токсина его экстрагируют из материала физиологическим раствором. Фильтрат или центрифугат экстракта вводят в дозе 0,5-0,8 мл внутрибрюшинно или внутривенно 3-4 белым мышам или 2 морским свинкам тот же материал после прогревания при 100° в течение 30 минут. Тип токсина определяют в реакции нейтрализации с типоспецифическими сыворотками.
Для обнаружения возбудителя ботулизма проводят посев на среду Китт-Тароцци в два флакона из каждого материала. Один флакон сразу после посева прогревают при 80° 20 минут.
Культуры идентифицируют по характеру роста на глюкозо-кровяном агаре и токсинообразованию. Наличие токсина и его тип определяют в культуре 4-8-дневного роста, как и при исследовании материала.
Срок исследования до 10 дней.
17. Туберкулез животных. Исследование проводят микроскопическим, бактериологическим, гистологическим и в необходимых случаях биологическим методами.
Микроскопию мазков из материала проводят световым (окраска по Циль-Нильсену) или люминесцентным методами.
Для посевов применяют среды Петраньяни или Гельберга (по 5-6 пробирок) и МПА (одна пробирка).
Культуры дифференцируют от кислотоустойчивых сапрофитов и атипичных микобактерий по культуральным свойствам; при необходимости определяют патогенность для лабораторных животных, каталазную, формамидазную активность и лекарственную устойчивость.
Биологический метод применяют для диагностических целей и определения типа возбудителя.
Обязательное биологическое исследование проводят:
а) при исследовании материала от убитых, реагировавших на туберкулин животных из ранее благополучных хозяйств в случаях отсутствия специфических патологоанатомических туберкулезных изменений (на 2 морских свинках или 2 кроликах, в зависимости от какого вида животного исследуют материал);
б) для определения типа возбудителя во вновь выявленных неблагополучных хозяйствах (на 2 морских свинках и 2 кроликах).
Морских свинок заражают подкожно в области паха, кроликов - внутривенно суспензией патматериала из расчета 1 г исследуемого материала, культурой - в дозе 1 мг бактериальной массы. Срок наблюдения 3 месяца.
При гистологическом исследовании срезы окрашивают гематоксилин-эозином.
Лабораторный диагноз устанавливают на основании результатов бактериологического, биологического и гистологического исследований.
Срок бактериологического и биологического исследований до 3 месяцев.
Срок гистологического исследования до 5 дней.
18. Туберкулез птиц. Материал исследуют патологоанатомическим, микроскопическим и в необходимых случаях бактериологическим методами.
Диагноз на туберкулез ставят при наличии характерных патологоанатомических изменений и обнаружении кислотоустойчивых микобактерий в мазках из органов, окрашенных по Циль-Нильсену.
При отсутствии патологоанатомических изменений, свойственных туберкулезу, проводят полное бактериологическое исследование, как указано в пункте 17.
Срок микроскопического исследования до 2 дней.
Срок бактериологического исследования до 1 месяца.
19. Паратуберкулез. Исследование проводят микроскопическим, гистологическим и серологическим методами.
Микроскопическое исследование проводят световым (с окраской мазков по Циль-Нильсену) или люминесцентным методами.
Срезы для гистологического исследования готовят из кусочков кишечника и брыжеечных лимфоузлов и окрашивают гематоксилин-эозином.
Серологическое исследование сывороток крови проводят по РСК.
Окончательный диагноз ставят на основании результатов микроскопических, гистологических и серологических исследований с учетом клинических, аллергических и эпизоотологических данных.
Срок микроскопического исследования до 3 дней.
Срок гистологического исследования до 5 дней.
Срок серологического исследования до 3 дней.
20. Бруцеллез. Диагностику проводят путем серологического исследования сывороток крови животных (РА, РСК и РДСК). В установленных инструкцией случаях применяют кольцевую реакцию с молоком.
