ГОСТ Р 53993-2010/ISO/TS 10272-2:2006
Группа Н09
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Часть 2
Метод подсчета колоний Campylobacter spp.
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Part 2. Method for the enumeration of Campylobacter spp.
ОКС 07.100.30
Дата введения 2012-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила изменения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2010 г. N 569-ст
4 Настоящий стандарт является идентичным международному документу ИСО/ТУ 10272-2:2006* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения и подсчета бактерий Campylobacter spp. Часть 2. Метод подсчета колоний" (ISO/TS 10272-2:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 2: Colony-count technique").
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (пункт 3.5).
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов ссылочным национальным стандартам Российской Федерации (и действующим в этом качестве межгосударственным стандартам) приведены в дополнительном приложении ДА
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета Campylobacter spp.
Настоящий стандарт распространяется:
- на пищевую продукцию и корма для животных;
- пробы окружающей среды в области производства и обращения пищевой продукции.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты*:
_______________
* Таблицу соответствия национальных (межгосударственных) стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.
ИСО 6887 (все части) Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований
ИСО 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований
ИСО 8261 Молоко и молочные продукты. Общие правила приготовления испытуемых проб, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований
ИСО/ТУ 11133-1 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 1. Общие правила по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории
ИСО/ТУ 11133-2 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие положения по приготовлению и производству питательных сред. Часть 2: Практические руководящие положения по определению эффективности питательных сред
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 Campylobacter (Campylobacter): Микроорганизмы, образующие характерные колонии на твердой селективной среде, когда их инкубируют микроаэробным способом при температуре 41,5 °С, но не при 25 °С, и которые обладают характерной подвижностью, биохимическими свойствами и способностью к росту, описанными в тех случаях, когда испытания проводят в соответствии с настоящим стандартом.
Примечание - Наиболее часто встречающимися видами являются Campylobacter jejuni и Campylobacter coli. Вместе с тем были описаны и другие виды (Campylobacter lari, Campylobacter upsaliensis и некоторые другие).
3.2 подсчитанное число Campylobacter (count of Campylobacter): Число Campylobacter, обнаруженное в миллилитре или в грамме испытуемой пробы, когда испытания проводят в соответствии с настоящим стандартом.
4 Сущность метода
4.1 Приготовление разбавлений
Приготовление десятичных разбавлений на основе испытуемой пробы - по ИСО 6887 и ИСО 8261.
4.2 Подсчет
Твердую селективную среду, модифицированный агар с углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (агар mCCD) инокулируют установленным количеством испытуемой пробы, если продукт является жидким, или исходной суспензии в случае других продуктов.
При соблюдении тех же условий приготовляют другие чашки, используя десятичные разбавления испытуемой пробы или исходной суспензии.
Чашки инкубируют при температуре 41,5 °С в аэробной атмосфере в течение 40-48 ч.
Колонии, предположительно Campylobacter, пересевают на неселективную агаровую среду, колумбийский кровяной агар, затем подтверждают посредством исследования под микроскопом и надлежащего биохимического испытания и теста на контроль роста.
Количество Campylobacter в 1 см или в грамме испытуемой пробы рассчитывают на основе количества подтвержденных типичных колоний в чашке.
5 Питательные среды и реактивы
5.1 Общие положения
Качество подготовки, изготовления и оценки эффективности питательных сред для выращивания Campylobacter - по ИСО 7218, ИСО/ТУ 11133-1 и ИСО/ТУ 11133-2.
5.2 Разбавитель по ИСО 6887.
5.3 Модифицированный агар с углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (агар mCCD)
5.3.1 Базовая среда
5.3.1.1 Состав:
мясной экстракт - 10,0 г;
продукт ферментативного переваривания животных тканей - 10,0 г;
натрия хлорид - 5,0 г;
древесный уголь - 4,0 г;
продукт ферментативного переваривания казеина - 3,0 г;
натрия дезоксихолат - 1,0 г;
железа (II) сульфат - 0,25 г;
натрия пируват - 0,25 г;
агар - 8,0-18,0 г*;
_______________
* В зависимости от прочности геля агара.
вода - 1000 см.
5.3.1.2 Приготовление
Основные компоненты или полную обезвоженную базовую среду растворяют в воде, доводя до кипения. При необходимости корректируют рН так, чтобы после стерилизации он был равен (7,4±0,2) при температуре 25 °С. Базовую среду переносят в колбы подходящей вместимости. Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.
5.3.2 Антибиотический раствор
5.3.2.1 Состав:
цефоперазон - 0,032 г;
амфотерицин В - 0,01 г;
вода - 5 см.
5.3.2.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде. Стерилизуют путем фильтрации.
5.3.3 Полная среда
5.3.3.1 Состав:
базовая среда (5.3.1) - 1000 см;
антибиотический раствор (5.3.2) - 5 см.
5.3.3.2 Приготовление
Антибиотический раствор добавляют в базовую среду, охлажденную до (47±2) °С, затем тщательно перемешивают. Около 15 см полной среды добавляют в стерильные чашки Петри (6.8). Дают затвердеть. Непосредственно перед использованием тщательно высушивают агаровые чашки, предпочтительно с открытыми крышками и поверхностью агара вниз, в сушильном шкафу (6.2) в течение 30 мин или до тех пор, пока поверхность агара не утратит видимую влагу. Если их готовят заранее, невысушенные агаровые чашки следует хранить не более 4 ч при комнатной температуре или в темноте при (5±3) °С не более семи дней.
5.3.3.3 Проверка эффективности
Определение селективности и производительности - по ИСО 11133-1. Информация о критериях эффективности в ИСО 11133-2, таблица В.5.
5.4 Колумбийский кровяной агар
5.4.1 Базовая среда
5.4.1.1 Состав:
продукт ферментативного переваривания животных тканей - 23,0 г;
крахмал - 1,0 г;
натрия хлорид - 5,0 г;
